[发明专利]一种金针菇多孢自交平板出菇育种方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌育种领域，具体的说涉及一种在平板培养基上用多孢自交的育种方法选育金针菇菌种的过程。

背景技术

金针菇是我国工厂化生产发展最快的食用菌种类。金针菇新品种的选育应用最频繁的就是杂交配对的育种方法。此种方法的缺点在于，对于亲本的选择具有局限性，即表现出目的性状的亲本其自身携带的基因多为杂合基因，或带有隐性有害基因，造成目的性状遗传不稳定，大大降低育种品质和育种效率。

后来又出现多孢自交的育种方法。金针菇自交后代中会表现出亲本所没有的优良性状，即若干性状出现超亲现象。并且在遗传与育种中有以下重要作用：1. 杂合基因分离、纯化；2. 淘汰有害隐性基因，改良遗传组成；3. 稳定遗传性状。

多孢自交目前的做法存在一定的不足，有改进的空间。目前的方法是：在平板培养基上涂上金针菇孢子进行菌丝培养，待菌丝混合生长后随机挑取菌块，纯化培养，通过显微镜镜检锁状联合确定双核菌株。这种方法的缺点是：随机挑取的菌块的菌株特性存在不确定性，一方面，双核菌株比例偏低，增大镜检的工作量；另一方面，对出菇后的子实体性状没有大致了解，不能提前根据育种目标对多孢自交菌株进行初步筛选，只能待栽培出菇后进行筛选，降低了选育效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种金针菇多孢自交平板出菇育种方法，应用于金针菇工厂化栽培优秀新菌种的选育中。

本发明的金针菇多孢自交平板出菇育种方法，包括以下步骤：

（1）孢子收集：收集亲本菌株的子实体单孢子；

（2）单孢子混合自交：将亲本的孢子涂在平板培养基上，进行多孢自交；

（3）平板出菇：待菌丝扭结、生成原基、发育成子实体；

（4）自交双核群体选取：根据发育成的子实体特性，挑取菌块，纯化培养，获得自交菌种；

（5）栽培和筛选：自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，得到新菌种。

具体方法步骤为：

（1）孢子收集：收集不同菌株的子实体单孢子。

分别取不同亲本菌株发育完全的金针菇鲜子实体，于无菌环境下剪去菌柄，将有菌褶一面平贴在平皿上，过夜，收集孢子印。

（2）担孢子混合自交：将亲本的孢子涂在平板PDA培养基上，进行多孢自交。23 ℃下黑暗中倒置培养5~10 d，肉眼可见大片密集菌落。

（3）平板出菇：8~12 ℃下黑暗中，继续倒置培养。待菌丝扭结、生成原基、发育成子实体，肉眼可见子实体的基本性状。

（4）自交双核群体选取：根据育种标准，及发育成的子实体特性，挑取菌块，挑入平板培养基。在23 ℃下黑暗中纯化培养3~5 d。在菌落外缘挑小菌丝块压水玻片于显微镜下(放大400倍)观察菌丝有无锁状联合，菌丝有锁状联合的为所需双核体，即获得的多孢自交菌株。在4℃条件下保存备用。

（4）栽培和筛选：自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。

工厂化条件下进行栽培。测量日均生长速度，观察生长势。子实体成熟时采收，并拍照。记录子实体单瓶产量、颜色、菌柄长度、直径、菌盖直径及出菇期、栽培周期等数据。

按照性状筛选优良菌株。筛选标准为：菇体白色，单瓶产量高（大于180g），栽培期短（小于45d），菇形整齐、美观（菌盖直径1~2.5cm，菌柄长度大于13cm，菌柄直径1~3cm。）

使用多孢自交平板出菇法，即待平板培养基上出菇后，选择性挑取出菇菌块，然后进行纯化、镜检和栽培，就能先一步对出菇栽培种的性状进行选择，也能提高双核菌株比例。实验证明，多孢自交平板出菇的育种方法是确实可行的，使用此法在选育过程中，将大大提高工作效率，选育质量也多一层保证。并且，选育出的金针菇菌种具有生长速度快、产量高、外型美观、遗传稳定、抗逆性强等特点。

具体实施方式：

一． 培养基与培养料的制备

培养基为PDA培养基。配方：去皮马铃薯200 g煮汁，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL，pH 7。置于15×150 mm小试管中，管口用硅胶塞塞住。