[发明专利]过滤染色计数细胞的方法及装置有效

专利信息
申请号: 201110100618.1 申请日: 2011-04-21
公开(公告)号: CN102288531A 公开(公告)日: 2011-12-21
发明(设计)人: 李京宝;商澎;李亚楠;骞爱荣 申请(专利权)人: 西北工业大学
主分类号: G01N15/14 分类号: G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30
代理公司: 西北工业大学专利中心 61204 代理人: 顾潮琪
地址: 710072 *** 国省代码: 陕西;61
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摘要:
搜索关键词: 过滤 染色 计数 细胞 方法 装置
【权利要求书】:

1.一种过滤染色计数细胞的方法,其特征在于包括下述步骤:

1)准备好需要计数的未知数量的实验组细胞和至少4组已知数量的标准组细胞悬液,各组细胞悬液的体积相同;

2)每个细胞悬液样品对应一个过滤装置,分别将各组细胞悬液通过过滤装置,使细胞截留在滤膜之上;

3)分别使用细胞悬液2倍以上体积的磷酸盐缓冲液清洗截留在过滤装置上的细胞;

4)分别加入细胞悬液1倍以上体积的浓度为0.1%~1%的结晶紫溶液于过滤装置中浸泡细胞10分钟~1小时;

5)分别吸去结晶紫溶液,用细胞悬液5倍以上体积磷酸盐缓冲液清洗过滤装置中的细胞;

6)分别排出过滤装置中残存液体;

7)分别用细胞悬液1倍以上体积的浓度为3%~30%的醋酸溶液冲洗过滤装置,收集滤液;

8)分别将所得滤液经稀释3倍体积以上后,使用可见分光光度计,测量570nm波长处光密度;

9)结合标准组已知细胞数量与光密度绘制标准曲线,得到光密度I标准与细胞数量N标准的关系公式:I标准=a×N标准+b,其中a为一元线性相关系数,b为截距,皆通过标准曲线计算得知;

10)根据标准曲线和实验组细胞样品的光密度计算实验组细胞数量,即N实验=(I实验-b)/a。

2.根据权利要求1所述的过滤染色计数细胞的方法,其特征在于:所述的细胞悬液由悬浮生长细胞直接使用,或贴壁细胞经过消化步骤形成。

3.根据权利要求1所述的过滤染色计数细胞的方法,其特征在于:所述的结晶紫溶液采用水、生理盐水或磷酸盐缓冲液作为溶剂配制。

4.一种实现权利要求1所述方法的过滤染色计数细胞装置,包括洗涤液容器、染色液容器、脱色液容器、废液容器、过滤装置、泵系统、比色装置、三通阀和计算机,其特征在于:实验组及标准组细胞悬液通过三通阀分别与洗涤液容器、染色液容器相连通,之后通过三通阀与脱色液容器相连通至过滤装置,过滤装置的输出口通过泵系统与比色装置相连,比色装置将测量数据反馈于计算机;待检测完成后,由和比色装置相连的导管将废液排除到废液容器中;在上述各个环节中,由计算机控制各个三通阀、泵系统以及比色装置工作。

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