[发明专利]过滤染色计数细胞的方法及装置有效
申请号: | 201110100618.1 | 申请日: | 2011-04-21 |
公开(公告)号: | CN102288531A | 公开(公告)日: | 2011-12-21 |
发明(设计)人: | 李京宝;商澎;李亚楠;骞爱荣 | 申请(专利权)人: | 西北工业大学 |
主分类号: | G01N15/14 | 分类号: | G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30 |
代理公司: | 西北工业大学专利中心 61204 | 代理人: | 顾潮琪 |
地址: | 710072 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 过滤 染色 计数 细胞 方法 装置 | ||
1.一种过滤染色计数细胞的方法,其特征在于包括下述步骤:
1)准备好需要计数的未知数量的实验组细胞和至少4组已知数量的标准组细胞悬液,各组细胞悬液的体积相同;
2)每个细胞悬液样品对应一个过滤装置,分别将各组细胞悬液通过过滤装置,使细胞截留在滤膜之上;
3)分别使用细胞悬液2倍以上体积的磷酸盐缓冲液清洗截留在过滤装置上的细胞;
4)分别加入细胞悬液1倍以上体积的浓度为0.1%~1%的结晶紫溶液于过滤装置中浸泡细胞10分钟~1小时;
5)分别吸去结晶紫溶液,用细胞悬液5倍以上体积磷酸盐缓冲液清洗过滤装置中的细胞;
6)分别排出过滤装置中残存液体;
7)分别用细胞悬液1倍以上体积的浓度为3%~30%的醋酸溶液冲洗过滤装置,收集滤液;
8)分别将所得滤液经稀释3倍体积以上后,使用可见分光光度计,测量570nm波长处光密度;
9)结合标准组已知细胞数量与光密度绘制标准曲线,得到光密度I标准与细胞数量N标准的关系公式:I标准=a×N标准+b,其中a为一元线性相关系数,b为截距,皆通过标准曲线计算得知;
10)根据标准曲线和实验组细胞样品的光密度计算实验组细胞数量,即N实验=(I实验-b)/a。
2.根据权利要求1所述的过滤染色计数细胞的方法,其特征在于:所述的细胞悬液由悬浮生长细胞直接使用,或贴壁细胞经过消化步骤形成。
3.根据权利要求1所述的过滤染色计数细胞的方法,其特征在于:所述的结晶紫溶液采用水、生理盐水或磷酸盐缓冲液作为溶剂配制。
4.一种实现权利要求1所述方法的过滤染色计数细胞装置,包括洗涤液容器、染色液容器、脱色液容器、废液容器、过滤装置、泵系统、比色装置、三通阀和计算机,其特征在于:实验组及标准组细胞悬液通过三通阀分别与洗涤液容器、染色液容器相连通,之后通过三通阀与脱色液容器相连通至过滤装置,过滤装置的输出口通过泵系统与比色装置相连,比色装置将测量数据反馈于计算机;待检测完成后,由和比色装置相连的导管将废液排除到废液容器中;在上述各个环节中,由计算机控制各个三通阀、泵系统以及比色装置工作。
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