[发明专利]一种利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的方法

权利要求书

1.一种利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的方法，包括使用含无孢子黑曲霉菌液体种子作为菌种制备黑曲霉发酵液，其特征是：制备黑曲霉发酵液的方法为：将菌体含量为10²-10⁴个/mL， PH值3-5的菌种液按装液量体积比的15%的接种量移至装入含有培养基的的一级摇瓶中，发酵温度为34℃+1℃，摇床转速为220-240rpm，发酵pH值为4.8-5.0，发酵时间为72h；将一级摇瓶中的发酵液按装液量体积比的15%的接种量移至装入含有培养基的二级摇瓶中，发酵温度为34℃+1℃，摇床转速为220-240rpm，发酵pH值为4.8-5.0，发酵时间为48h；将二级摇瓶中的发酵液按装液量体积比的15%的接种量移至装入含有培养基的三级摇瓶中，发酵温度为34℃+1℃，摇床转速为220-240rpm，发酵pH值为4.8-5.0，发酵时间为72h；将三级摇瓶中的发酵液按装液量体积比的15%的接种量移至装入含有培养基的四级摇瓶中，发酵温度为34℃+1℃，摇床转速为220-240rpm，发酵pH值为4.8-5.0，发酵时间为144h，制成发酵液；所得发酵液中含有糖化酶，可直接作为糖化酶使用或进一步精制后使用。

2.根据权利要求1所述利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的方法，其特征是：制备黑曲霉发酵液所用培养基成分为：

一级摇瓶培养基：玉米淀粉80g/L，豆饼粉40g/L，玉米浆10mL/L，pH值4.8，余量为水；

二级摇瓶培养基：β-环糊精发酵废液200mL/L，玉米淀粉70g/L，玉米粉40g/L，豆饼粉20g/L，玉米浆5mL/L，高温淀粉酶1-2滴，余量为水，pH值4.8；

三级摇瓶培养基：β-环糊精发酵废液400mL/L  ，玉米淀粉80g/L，玉米粉50g/L，豆饼粉30g/L，玉米浆5mL/L，硫酸铵5g/L，高温淀粉酶1-2滴，余量为水，pH值4.8；

四级摇瓶培养基：β-环糊精发酵废液530mL/L，玉米淀粉180g/L ，玉米粉50g/L，豆粕40g/L，玉米浆20mL/L，硫酸铵5g/L，高温淀粉酶适1-2滴，余量为水，pH值4.8。

3.根据权利要求1所述利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的方法，其特征是：作为液体种子的菌种应当符合菌球含量为10²-10⁴个/mL、PH值4-5的要求。

4.根据权利要求1所述利用β-环糊精发酵废液生产糖化酶的方法，其特征是：作为液体种子的菌种制备方法是：在无菌条件下，用无菌吸管抽吸0.1ml的解冻的菌球含量为10³个/mL的无孢子黑曲霉菌液，在淀粉平皿培养基上涂布，32-36℃恒温培养4-5天；然后挑取淀粉培养基上1-2个菌形规整、内凹陷规则的菌落，放置在查氏平皿培养基上划线分离，于32-36℃恒温培养4-6天使其成熟，成熟后放入0-4℃冰箱中保存；配制查氏半干体培养基，灭菌后用接种铲或环取查氏平皿培养基上已经成熟的1个单菌落于已灭菌的查氏半干体培养基中，查氏半干体培养基所用容器是装液量为100ml/250ml的三角瓶，34℃恒温培养5-8天，在此期间要每天摇瓶5次；然后取查氏半干体培养液以体积比15%的接种量接入种母摇瓶培养基中，种母摇瓶培养基所用容器是装液量为100ml/250ml的三角瓶，摇床转速为300转，在34℃恒温摇床培养48-72h待用。