[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的新型真菌免疫调节蛋白FIP-NHA及其基因

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，涉及一种具有抗肿瘤活性的新型真菌免疫调节蛋白FIP-NHA及其基因。

背景技术

真菌免疫调节蛋白(FIPs)是近年来从一些高等担子菌(蘑菇类)子实体中提取得到的一类小分子蛋白质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、降低胆固醇和抑制肌体自体免疫等多种生物学活性，因而FIPs具有重要的保健、医学、药学价值。它与传统的免疫调节蛋白植物凝集素相似，却具有其自身明显的特点和优势，具体表现为以下几个方面：1)凝集素分子量一般较大，为20-100kD，而FIPs分子量较小，为13kD左右；2)单糖及二糖都不减弱FIPs的血凝集和免疫调节活性，而典型的凝集素会受到单糖或者二糖的抑制；3)FIPs N端10个氨基酸的α螺旋对于诱导免疫活性十分重要，而此结构在一些凝集素中并不存在。

目前国际上已报道从赤灵芝(Ganoderma lucidum)，紫灵芝(Ganodermajaponcium)，松杉灵芝(Ganoderma tsugae)，小孢灵芝(Ganoderma microsporum)，金针菇(Flammulina velutipes)和草菇(Volvariella volvacea)分离纯化了6种FIPs蛋白，分别命名为LZ-8、Gja、Gts、Gmi、Fve、Vvo和Vvl。6种FIPs蛋白由110～114个氨基酸组成，没有His、Cys和Met，但是富含Asp和Val。其N端的氨基酸均为乙酰化阻断氨基酸，分子量约为12～13kD。该类蛋白与人类及鼠类的免疫球蛋白重链可变区的保守部分有较高的同源性。不同的FIPs之间具有较高的同源性，约为57％～100％。天然的真菌免疫调节蛋白都是由两个相同的亚基组成的同源二聚体。N端大约13个氨基酸形成的α螺旋对真菌免疫调节蛋白二聚化的形成以及有效行使其免疫调节功能十分必要。近年来，随着真菌免疫调节蛋白功能的发现以及人们对健康需求的增强，对免疫调节蛋白的研究和利用提出了更高的要求，而真菌免疫调节蛋白作为一类新型免疫调节蛋白，具有很大的潜在应用价值。基于已知的FIPs蛋白又很少，人们对它的生物学特性、免疫调节功能和分子生物学研究有浓厚的兴趣，尤其是随着分子生物学和生物工程技术的迅速发展，利用工程菌株的培养获得大量重组免疫调节蛋白深入开展对真菌免疫调节蛋白的结构、功能和工程菌高效表达的研究具有重要的意义和应用价值，真菌免疫调节蛋白的开发利用具有广阔前景。

临床与医药应用均具有一定的剂量要求，实验过程中发现不同的FIP家族成员在促发免疫反应过程中存在剂量效应，比如在激活人外周血淋巴细胞增殖实验中，FIP-fve的有效浓度为100μg/ml，FIP-vvo的有效浓度仅为5μg/ml，而LZ-8促进鼠脾细胞增殖的最佳浓度是3.13μg/ml。开发和应用此类药品，必须获得相当数量的蛋白质纯品，然而蘑菇含有大量多糖及其它复杂成分，从蘑菇提取天然FIPs难度大又量少，从每千克蘑菇只能提取毫克级蛋白，因此蘑菇提取蛋白成本高，耗时，费力，高消费，量少。1997年HSU等从3kg草菇子实体中提纯FIP-vvo，经不同纯化步骤最终所获得的蛋白质仅94mg。因此获得高产稳定的重组表达FIPs蛋白势在必得。

本发明选取新的思路，利用生物信息学方法得到一种新的真菌免疫调节蛋白，并且利用基因工程的方法得到纯品FIP-NPA蛋白，对其进行一系列免疫学功能鉴定和抗肿瘤等免疫学活性分析。目前世界上报道的FIPs蛋白只有六种，并且全部是从蘑菇中得到的，这样本发明既丰富了FIPs家族的种类，避免了蘑菇蛋白提取的种种缺陷，又满足了临床研究的需求和产业化的需要。

发明内容

本发明的目的是提供来源于菌株Nectria haematococca mpVI 77-13-4(其ATCC保藏号为：MYA-4622)的真菌免疫调节蛋白FIP-NHA。

本发明的再一目的是提供上述真菌免疫调节蛋白FIP-NHA的基因。

本发明的再一目的是提供包含上述真菌免疫调节蛋白FIP-NHA的重组载体。

本发明的再一目的是提供包含上述真菌免疫调节蛋白FIP-NHA的重组菌株。

本发明的再一目的是提供一种制备真菌免疫调节蛋白FIP-NHA的方法。

本发明的再一目的是提供上述含有上述真菌免疫调节蛋白FIP-NHA的抗肿瘤药物。