[发明专利]一种耐高温中性木聚糖酶基因及含有该基因的工程菌

权利要求书

1.一种耐高温中性木聚糖酶基因，其特征在于：基因序列见序列1。

2.根据权利要求1所述的耐高温中性木聚糖酶基因，其特征在于：所述耐高温中性木聚糖酶基因全长为1134bp，命名为XynG1-1，其编码377个氨基酸，其分子量为41267Da，其中前39个氨基酸为其信号肽，第49～235个氨基酸为糖苷水解酶GH11家族的保守序列，第263～377个氨基酸为碳水化合物结合组件CBM6家族的保守序列。

3.根据权利要求1所述的耐高温中性木聚糖酶基因，其特征在于：所述基因来源于坎皮纳斯类芽孢杆菌。

4.一种携带权利要求1中所述的耐高温中性木聚糖酶基因的菌株。

5.根据权利要求4所述的携带耐高温中性木聚糖酶基因的菌株，其特征在于：宿主菌为大肠杆菌E.coli BL21。

6.根据权利要求4或5所述的携带耐高温中性木聚糖酶基因的菌株，其特征在于：构建方法如下：

(1)根据已报道木聚糖酶基因，分析其保守序列，设计本发明的耐高温中性木聚糖酶基因的扩增引物如下：

上游引物为：序列2，下游引物为：序列3；

扩增模板为坎皮纳斯类芽孢杆菌基因组DNA，其扩增的反应条件为：95℃5min；94℃45S，55℃45S，72℃90S，30个循环；72℃延长10min，

PCR扩增产物经0.8％的琼脂糖凝胶电泳，得到1134bp的单一条带，回收PCR产物，得到耐高温中性木聚糖酶全基因；

(2)重组质粒pET-XynG1-1的构建与鉴定

将PCR纯化产物与载体pET-22b(+)经Hind III和XhoI双酶切后，分别回收酶切产物，应用DNA连接试剂盒的Solution I在16℃的条件下连接12h，将目的基因XynG1-1定向连接至载体pET-22b(+)，将连接产物应用化学转化法转化到E.coli DH5α感受态细胞中，在含有Amp的LA培养基中筛选培养，挑取阳性转化子，培养后提质粒，用Hind III和XhoI双位点单、双酶切鉴定，测序；

(3)大肠杆菌E.coli BL21基因工程菌的构建

将测序正确的重组质粒pET-XynG1-1应用化学转化的方法转化到E.coli BL21感受态细胞中，挑取阳性转化子，进行IPTG诱导表达。