[发明专利]一种多维色谱联用技术分析烟草香味成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及烟草复杂体系分离分析方法，具体指一种多维色谱在线联用技术分离分析烟草香味成分，该方法利用样品前处理技术提取烟草香味成分，然后对提取的烟草香味成分做液相色谱-毛细管气相色谱/质谱在线联用分离分析，实现了对烟草香味成分在线、高效分离，并高灵敏检测的目的。

背景技术

烟草中的化学成分相当复杂，且许多成分含量甚微。到目前为止，从烟草中已分离出上千种挥发性、半挥发性有机物。其中对卷烟吸食品质有重要影响的香味成分基本上都包含在这些挥发性、半挥发性有机物当中。由于这些挥发性、半挥发性香味成分中含有酸类、醇类、醛类、酮类、酯类、吡啶类、吡嗪类等不同结构、不同极性、甚至是不同酸碱性的化合物。因此它们被认为是烟草复杂体系中最难分离分析的一类烟草化学成分。

早期烟草中的挥发性成分﹑半挥发性香味成分的分析工作，由于分离、纯化、鉴定上的困难，能分析鉴定的种类有限，对于许多微量成分的分析就更加困难。二十世纪五十年代以前，烟草及烟气组成的分离鉴定方法集中在经典的化学方法上，即将经过结晶或蒸馏的烟叶或卷烟烟气粒相物的馏出物分出中性馏分（脂肪烃、多环苯烃、酯类等）、酸性馏分（酸和酚）和碱性馏分（胺、生物碱等）。20世纪50年代后，气相色谱技术迅速发展，毛细管气相色谱仪及GC/MS联用技术在烟草中的挥发性﹑半挥发性成分分析中应用广泛，在了解烟草香味物质的组成和含量方面开展了大量工作。

进入21世纪，多维色谱联用技术也已被用于烟草挥发性、半挥发性香味成分的定性定量分析。2004年，路鑫等应用GC/MS和GC×GC/TOFMS仪器对烟气粒相物中的中性馏分进行了表征。初步鉴定出1800多种烃类化合物，包括脂肪族链烃、芳烃和萜烯化合物。其中鉴定出重要萜烯类化合物的数目超过100种。2006年，李莉建立了GC×GC-TOFMS用于烟草中挥发性、半挥发性酸性成分和碱性成分的定量定性分析方法。很显然，多维色谱联用技术在解决烟草复杂体系的分离分析方面发挥了重要作用，大大提高了定性定量的准确性。然而，对全二维GC×GC-TOFMS来说，由于仪器价格过于昂贵，限制了它的推广使用。

2009年，作者所在的实验室首次建立了液相色谱-气相色谱离线联用技术分离分析烟草挥发性、半挥发性成分的方法。在此基础上，通过引入液相色谱-毛细管气相色谱/质谱在线联用接口，研制出液相色谱-毛细管气相色谱/质谱在线联用仪器，并用于分离分析烟草香味成分。

发明内容

本发明的目的正是针对现有技术中所存在的离线联用时操作步骤过于繁琐等不足，通过液相色谱-毛细管气相色谱/质谱在线联用而提供一种分离分析烟草香味成分的新方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明的利用多维色谱联用技术分析烟草香味成分的方法包括以下步骤：

(1) 烟草香味成分的提取；

(2) 烟草香味成分的液相色谱-毛细管气相色谱/质谱在线分离分析：

A、烟草香味成分的正相液相色谱分离;

B、液相色谱流出组份分别储存在接口多位阀定量环中;

C、待液相色谱流出组份收集完毕，通过控制联用仪器接口中的十通阀；使得储存在多位阀定量环中的馏分在载气推动下，分别进入气相色谱/质谱联用仪进行分离分析。

在本发明中，所述的烟草可以为烟叶，也可以是卷烟烟丝。

步骤(1)中所述烟草香味成分的提取可以是同时蒸馏萃取，也可以是加速溶剂萃取。

所述的多维色谱技术是液相色谱-气相色谱/质谱联用技术。所述的联用是指在线联用。

所述的多位阀可以是六位阀，也可以是八位阀。

所述的正相液相色谱分离可以选用氨基柱，也可以采用氰基、硅胶或醇基极性分析柱。

所述液相色谱分离条件为：

色谱柱：氨基分析柱(250mm×1.0mm i.d×5μm.)；

流动相A：正己烷；流动相B：二氯甲烷/乙腈(66:34, v/v)

洗脱梯度： 时间（min）          0      5      6      45     50

            流动相A（V/V）   90％   90％    0％    0％    90％

进样体积：1μL

流动相流速：30μL/min

柱温：30℃

检测波长：254nm。

所述气相色谱/质谱联用分离分析条件为：

预柱：15m×0.53mm i.d.