[发明专利]胞苷三磷酸的基因工程制备方法有效
| 申请号： | 201110094643.3 | 申请日： | 2011-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN102199644A | 公开（公告）日： | 2011-09-28 |
| 发明（设计）人： | 汪仁;李晓丹;夏冰;江玉梅;贺佳;王忠 | 申请（专利权）人： | 江苏省中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30;C12N15/55;C12N15/60;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/63;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胞苷三磷酸 基因工程 制备 方法 | ||
1.胞苷三磷酸的制备方法，其特征在于：使用单一的基因工程菌的培养物或者其处理物作为酶源，催化包括乳清酸、氯化铵等底物进行反应，在反应液中生成、积累胞苷三磷酸，并从所述反应液中提取胞苷三磷酸。
2.根据权利要求1所述的胞苷三磷酸的制备方法，其特征在于：所述基因工程菌具有编码乳清苷酸焦磷酸化酶、核苷二磷酸激酶、尿甘酸激酶、乳清苷酸脱羧酶和胞苷三磷酸连接酶的基因。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：可诱导表达所述胞苷三磷酸连接酶的基因位于所述基因工程菌的质粒上。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：可诱导表达所述乳清苷酸焦磷酸化酶、核苷二磷酸激酶、尿甘酸激酶和乳清苷酸脱羧酶的基因位于所述基因工程菌的染色体上。
5.根据权利要求3和4所述的方法，其特征在于：可诱导表达所述编码胞苷三磷酸连接酶、乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶和核苷二磷酸激酶的基因片段来源于大肠杆菌。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的胞苷三磷酸的制备方法，其特征在于：所述基因工程菌的制备方法包括如下步骤：
a)将位于可诱导表达启动子后，来源于大肠杆菌的编码乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶和核苷二磷酸激酶的基因片段整合到宿主细胞的染色体上；
b)将来源于大肠杆菌的可诱导表达胞苷三磷酸连接酶的基因片段酶切后与质粒载体连接形成重组质粒；
c)将所述重组质粒转入到所述宿主细胞内。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述质粒载体为质粒pUC18。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。
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