[发明专利]一种豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物、检测方法及其应用无效
| 申请号： | 201110092257.0 | 申请日： | 2011-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN102140555A | 公开（公告）日： | 2011-08-03 |
| 发明（设计）人： | 林石明;廖富荣;黄蓬英;吴媛 | 申请（专利权）人： | 厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 厦门市新华专利商标代理有限公司 35203 | 代理人： | 李宁 |
| 地址： | 361026 福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 豇豆花叶病毒 蚕豆 病毒 通用 rt pcr 检测 引物 方法 及其 应用 | ||
1.一种豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物，其特征在于由正向和反向引物组成，其正向引物的核苷酸序列见SEQ ID No.1：5′- TGYGAYTAYDVHWSWTTYGATGG -3′；反向引物的核苷酸序列见SEQ ID No.2：5′- AKYARRTTRTCATCHCCATA -3′；其中Y= C/T，D= G/A/T，V=G/A/C，H=A/T/C，W=A/T，S=G/C， K= G/T，R= A/G。
2.一种如权利要求1所述的豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测的检测方法，其特征在于包括如下步骤：以样品总RNA为模板，利用上述引物进行RT-PCR扩增，反应结束后凝胶电泳检测扩增产物，根据扩增DNA片段的位置判定结果，侵染这两个病毒属病毒的病症叶片中均能检出326~343 bp的DNA片段。
3.如权利要求2所述的一种豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物的检测方法，其特征在于：所述的RT-PCR反应包括反转录和PCR扩增两个过程。
4.如权利要求3所述的一种豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测的检测方法，其特征在于：所述的反转录反应的温度为42℃，PCR扩增的先用退火温度42℃进行5个循环，然后用退火温度52℃进行30个循环，延伸温度为72℃。
5.一种如权利要求1所述豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物的应用，其特征在于：所述的引物对样品总RNA进行RT-PCR扩增后对所扩增的DNA片段进一步序列测定后，能快速鉴定豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒的种类。
6.一种如权利要求1所述豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物的应用，其特征在于：所述豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测用简并引物能应用于豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒通用RT-PCR检测试剂盒。
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