[发明专利]几丁质酶ChiCD3及其编码基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种几丁质酶ChiCD3及其编码基因和应用。

背景技术

几丁质又名甲壳素、几丁聚糖，是N-乙酰-β-D-葡萄糖胺(N-Acetyl-β-D-Glucosamine，简称GlcNAc)以β-1，4糖苷键连接起来的直链多聚物，是一种类似于植物纤维的六碳糖聚合体。几丁质广泛存在于低等植物、菌类、藻类，节肢动物虾、蟹及昆虫的外壳和软骨，高等植物的细胞壁等，是自然界中仅次于纤维素的第二大天然生物有机资源，年生物合成量达100亿吨。

几丁质酶(EC.3.2.14)能将几丁质内的β-1，4糖苷键水解，最终分解为N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)。根据作用方式和酶解产物，将其分为内切几丁质酶、外切几丁质酶和几丁二糖酶。内切几丁质酶从几丁质链的任一部位切割，产生几丁质寡聚糖，如(GlcNAc)₂、(GlcNAc)₃等；外切几丁质酶又称N-乙酰-β-D-葡萄糖胺酶，此酶从几丁质寡糖或几丁质链的非还原末端依次切下N-乙酰-β-葡萄糖单体；几丁二糖酶则是专一性地将几丁二糖降解为几丁单糖。

发明内容

本发明的目的是提供一种几丁质酶ChiCD3及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质(ChiCD3蛋白)，来自维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)，为如下(a)或(b)或(c)：

(a)序列表中序列1自N末端第34至1019位氨基酸残基组成的蛋白质；

(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有几丁质酶功能的由序列1衍生的蛋白质。

为了使(a)或(b)或(c)中的ChiCD3蛋白便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

  标签  残基数  序列  Poly-Arg  5-6(通常为5个)  RRRRR  Poly-His  2-10(通常为6个)  HHHHHH  FLAG  8  DYKDDDDK  Strep-tag II  8  WSHPQFEK

  c-myc  10  EQKLISEEDL