[发明专利]狂犬病灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.狂犬病灭活疫苗，其特征在于：将狂犬病病毒dG株灭活抗原与佐剂胶混合制成，其中佐剂占总重量的10-20％；

所述狂犬病病毒dG株灭活抗原是由滴度为5.0×10⁶-1.0×10⁷FFU/mL的狂犬病病毒dG株病毒液和浓度为5.0×10⁵-1.0×10⁶个/mL的BHK-21细胞悬液混合，在33-37℃环境中培养72-96小时，冻融、离心分离收集上清液，调整上清液pH至7.4-7.6，按终体积比浓度为0.025％-0.05％逐滴加入β-丙内酯，再经灭活、水解制成的。

2.如权利要求1所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述佐剂为法国SEPPIC公司生产的蒙特那.胶。

3.如权利要求1所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述狂犬病病毒dG株灭活抗原的制备方法步骤包括：

(1)将狂犬病病毒dG株的病毒液滴度调整为5.0×10⁶-1.0×10⁷FFU/mL，将BHK-21细胞悬液的浓度调整为5.0×10⁵-1.0×10⁶个/mL，取调整后BHK-21细胞悬液与调整后的病毒液混合，其中调整后的病毒液体积占混合液总体积的10-20％；将所述病毒液与BHK-21细胞悬液的混合液按转瓶总体积的10％接种于转瓶中，调整转瓶速度为8-12转/小时，在33-37℃环境中培养；

(2)培养72-96小时后，将转瓶内的培养液在-50℃--15℃下反复冻融3-5次，5000-8000转/分钟2-4℃离心30-50分钟，去除沉淀的细胞碎片，收集上清液，用重量百分比浓度为7.4-7.6％的NaHCO₃在4℃环境中调整所述上清液的pH至7.4-7.6；

(3)将收获的病毒液按终体积比浓度为0.025％-0.05％逐滴加入β-丙内酯，在3-4℃灭活24小时；将灭活的病毒液再经37℃水解2-3小时。

4.如权利要求3所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述(1)步骤中，培养后的病毒滴度大于等于1.0×10⁸FFU/mL。

5.如权利要求1所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述转瓶放置于细胞培养转机内，所述细胞培养转机为青岛依爱通信设备有限公司生产的型号为ZP1-2-45的细胞培养转机。

6.如权利要求1所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述BHK-21细胞为第115代的BHK-21细胞。

7.一种狂犬病灭活疫苗的制备方法，其特征在于：将狂犬病病毒dG株灭活抗原以及占制成疫苗总重量的10-20％佐剂加入至搅拌罐中，以200-500转/分的搅拌速度搅拌30-50分钟。

8.如权利要求1所述的一种狂犬病灭活疫苗，其特征在于：所述佐剂为法国SEPPIC公司生产的蒙特那.胶。