[发明专利]一种利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株的方法

权利要求书

1.一种利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1，胚状体不定芽诱导；A2，外植体获得：以小孢子胚状体诱导出不定芽叶片达1cm时起计算叶片生长日龄，选用一定生长日龄的叶片作为离体培养的外植体；A3，外植体再生芽的分化诱导，将步骤A2获得的外植体接种于外植体再生芽分化培养基上进行离体培养，培养条件为：温度(25±1)℃，光照16h·d^-1，光强为2000lx的条件下诱导培养；A4，再生芽的生根诱导与移栽，剪下长有3～4片叶的再生芽插入MS+NAA 0.3mg·L^-1生根培养基进行生根；当DH株根系长至4～5cm左右时开始炼苗，三角瓶封口膜先半开半闭，2天后完全打开，7天后取出DH株小苗将根部残留培养基用流水洗净，移栽到装有专用培养土的培养钵中，所述的专用培养土，按照体积比计为培养土∶珍珠岩∶蛭石＝2∶1∶1，同时将培养钵放至有少量水的穴盘之中并置于半阴处，加强浇水管理，1周后带基质移栽到大田中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A2中，所述的外植体叶片生长日龄为25天。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外植体再生芽分化培养基为：MS+6-BA 2.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1+GA₃1.5mg·L^-1；蔗糖、琼脂浓度和pH值分别为30g·L^-1、8g·L^-1和5.8。