[发明专利]基于脱细胞DNA检测致DNA断裂物的胶体金试纸条

说明书

技术领域：本发明是检测致DNA(脱氧核糖核酸)断裂物的快速检测方法，致DNA(脱氧核糖核酸)断裂物包括：自由基、遗传毒性物质和辐射物。用于水质、空气质量、土壤质量、食品质量检测与监测，以及疾病机制探索和抗氧化物质筛选等工作中。

背景技术：现有检测致DNA断裂物的方法包括：牛胸腺DNA、脱细胞-核DNA、质粒DNA、微核试验、染色体畸变试验、荧光原位杂交试验(FISH)等。现有的检测方法很难开展现场的快速检测。利用脱细胞DNA稳定，对致DNA断裂物敏感性高、特异性好、适用性强的优点，在诸多研究领域均有应用。

发明内容：本发明的技术方案是：合成一定长度任意序列DNA片段或单一碱基(胞嘧啶C、胸嘧啶T、腺嘌呤A和鸟嘌呤G)的DNA片段，该片段在缓冲液中不形成双螺旋，保持单链；在该DNA片段的5’和3’端分别标记不同的抗原(5’为A和3’端为B)，把标记的DNA片段作为检测受试物的平台；抗A抗体1吸附于有色颗粒，如胶体金、纳米金和乳胶颗粒等，在颗粒表面形成抗体包被；将另一种特异性抗B抗体和抗A抗体2以线条状固定于膜上形成检测线，该膜通常为硝酸纤维素膜或尼龙膜。本发明的优势为完成DNA断裂物的快速检测。

附图及说明：

图1为本发明基于脱细胞DNA检测致DNA断裂物的胶体金试纸条示意图，包括：1.抗A抗体2检测线；2.抗B抗体检测线；3.抗原A；4.单链DNA；5.抗原B；6.抗A抗体；7.有色颗粒。

图2、图3和图4为本发明的实施实例示意图：图2表示DNA片段无断裂，抗B抗体检测线显色；图3表示DNA片段部分断裂，抗B抗体检测线和抗A抗体2检测线均显色；图4表示DNA片段完全断裂，抗A抗体2检测线显色。

具体实施方式：受试物用缓冲液稀释，加入一定浓度的标记DNA片段，室温下反应30分钟，插入检测试纸条，根据检测带的显色情况判断受试物是否具有致DNA断裂作用。结果判断：如果受试物未导致DNA断裂，DNA片段完整，形成抗原A-抗A抗体1有色颗粒抗原B复合物，在溶液中通过毛细虹吸作用向上移动至抗体B检测线时与线条上的抗体B结合，形成有色的B检测带；如果受试物导致全部DNA断裂，则仅形成抗原A-抗A抗体有色颗粒复合物，该复合物无抗原B，在溶液中通过毛细现象向上移动至抗体B检测线时越过抗体B，在抗A抗体2检测线未形成有色的A检测带；如果部分断裂，则形成两种复合物(抗原A-抗A抗体1有色颗粒抗原B复合物和抗原A-抗A抗体1有色颗粒复合物)，在抗B抗体和抗A抗体2检测线形成两条检测带。