[发明专利]一种三疣梭子蟹微卫星标记的六重PCR检测方法

权利要求书

1.一种三疣梭子蟹微卫星标记的六重PCR检测方法，它包括：(1)设计和合成六重PCR引物；(2)提取基因组DNA；(3)六重PCR反应；(4)检测PCR产物，其特征在于所述六重PCR反应包括六重PCR反应体系和六重PCR反应程序，所述六重PCR反应体系的引物为Ptr33a、Ptr95、Pot34、Pot42、Pot44和Pot57的组合，所述各引物序列如下：

Ptr33a：F：ACAACGCCAACAATAGCA

        R：CACCGCACTTTACAGCAC；

Ptr95：F：CCTTGCCTTTCACTATACAC

       R：GACCCACTTGTTATCGTTTT

Pot34：F：AGGAATGGTTGCAAAGATCG

       R：TGCGACTTGACACTCACCTC

Pot42：F：TCATCACACAGGCTCACTCA

       R：CATCTTCCACCTTCCTCCAA

Pot44：F：ATTCACTTATTCGCACTGCT

       R：GCAAGGGAAAATAGAAGACA

Pot57：F：TCTCATTTTCTCCCCCTCCT

       R：TCCTCCTTTCTGCTGACCAC

2.根据权利要求1所述的一种三疣梭子蟹微卫星标记的六重PCR检测方法，其特征在于所述六重PCR反应体系为：10×Buffer 1.5μL；15mmol/L MgCl₂ 1.2μL；2.5mmol/L dNTP 1.5μL；所述引物Ptr33a，Ptr95，Pot42，Pot44和Pot57分别为0.4μL，Pot34正反引物各0.5μL，各引物浓度均为10pmol/μL；50ng/μL三疣梭子蟹基因组DNA 0.6μL；5U/μL Taq聚合酶0.12μL；ddH₂O补充至15μL。

3.根据权利要求1或2所述的一种三疣梭子蟹微卫星标记的六重PCR检测方法，其特征在于所述PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火1min，72℃延伸1min，共进行25次循环；最后72℃延伸5min；4℃保存并结束反应。

4.根据权利要求1所述的一种三疣梭子蟹微卫星标记的六重PCR检测方法，其特征在于采用琼脂糖凝胶电泳方法检测PCR产物。