[发明专利]金纳米粒子比色法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法

权利要求书

1.一种金纳米粒子比色法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于利用金纳米粒子的聚集和酶抑制的比色方法检测食品中有机磷农药的残留量，包括以下步骤：金纳米粒子(AuNPs)的制备；观察金纳米粒子、底物和酶体系的比色反应，并测定紫外-可见吸收光谱；分别对金纳米粒子，金纳米粒子、底物和酶体系进行透射电镜表征；运用金纳米粒子聚集和酶抑制的比色方法检测有机磷农药并进行实际样品的检测。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述金纳米粒子(AuNPs)的制备步骤如下：

所有的玻璃器皿都经过王水浸泡，双蒸水清洗，晾干备用，配制试剂所用蒸馏水需通过0.45μm的滤膜过滤；制备时，向洁净的三口烧瓶中加入1mmol/L的氯金酸50mL，在搅拌的情况下使其沸腾，紧接着快速加入38.8mmol/L的柠檬酸三钠5mL，边加热边搅拌，溶液由淡黄色变成酒红色，反应持续10分钟，停止加热，溶液冷却至室温后，用0.45μm的微孔膜过滤，4℃保藏，所制得的金纳米粒子粒径为13nm。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述观察金纳米粒子、底物和酶体系的比色反应的步骤如下：

在四个试管(2.0mL)中分别依次加入13nm的金纳米粒子180μL，娃哈哈纯净水720μL，含有15μM碘化乙酰硫代胆碱的磷酸盐缓冲液(PBS，10mM，pH＝8.0)100μL，再依次加入不同浓度的AChE(a，0mU/mL；b，100mU/mL；c，200mU/mL；d，350mU/mL；e，500mU/mL)10μL，然后将混合物在25℃下培养5min，观察颜色变化。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述测定紫外-可见吸收光谱的步骤如下：

在四个试管(2.0mL)中分别依次加入13nm的金纳米粒子180μL，娃哈哈纯净水720μL，含有15μM碘化乙酰硫代胆碱的PBS(10mM，pH＝8.0)100μL，再依次加入不同浓度的AChE(a，0mU/mL；b，100mU/mL；c，200mU/mL；d，350mU/mL；e，500mU/mL)10μL，然后将混合物在25℃下培养一定时间(min)，在碘化乙酰硫代胆碱水解的过程中(0-80min)，每隔两分钟测定一次紫外-可见吸收光谱。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述透射电镜表征的步骤如下：

①样品制备

吸取13nm金纳米粒子180μL，娃哈哈纯净水720μL，含有15μM碘化乙酰硫代胆碱的PBS(10mM，pH＝8.0)100μL，500mU/mL的乙酰胆碱酯酶10μL于2mL离心管中，作为对照，另一离心管中不加底物和乙酰胆碱酯酶，在25℃下同时培养10min；将两种样品分别滴于两个铜网上，室温晾干备用；

②参数

用TECNAI F20透射电镜于200kV的加速电压下扫描样品①的透射电镜。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述比色方法检测有机磷农药的步骤如下：

以甲胺磷为有机磷农药的代表用比色方法检测：

向含有180μL13nm金纳米粒子，720μL娃哈哈纯净水和100μL 15μM碘化乙酰硫代胆碱的PBS(10mM，pH＝8.0)的体系中，分别加入不同浓度的甲胺磷溶液标准品和10μL 500mU/mL的乙酰胆碱酯酶，金纳米粒子的聚集程度将随着农药浓度的不同而不同；

根据A₅₂₂与甲胺磷的浓度建立标准曲线，甲胺磷的检出限为1.40ng/mL，线性范围为0.02μg/mL-1.42μg/mL。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述实际样品的检测是取卷心菜为蔬菜的代表进行的。

取10g卷心菜，将其切碎，并和50mL的甲醇混合并超声搅拌60分钟，取上清液，并通过滤纸过滤。提取和过滤重复两次，过滤液用10mL的甲醇漂洗，其混合液再在真空旋转蒸发器里被浓缩，溶液的体积被浓缩到0.5mL之后达到干燥状态，残渣在娃哈哈纯净水中溶解，定容到5mL。在样品提取液中，如权利6所述，加入不同浓度的甲胺磷标准品。