[发明专利]一种芽孢杆菌培养基及培养方法

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及一种芽孢杆菌培养基及培养方法，属于微生物工程技术领域。

(二)背景技术：

芽孢杆菌的通用培养基为CM培养基，其成分为蛋白胨、牛肉膏、NaCl，成本较高。

玉米酒精糟液是玉米为原料生产酒精时，酒精发酵醪在蒸出酒精后，排出的废液。酒精发酵只是利用了原料玉米中85～93％的淀粉，其余的物质均残留在酒糟中，因此酒糟中含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、纤维素、矿物质和微生物菌体等营养成分，且不含重金属元素和有毒物。若能将可用的物质全部资源化，则不仅能解决酒精糟液排放带来的污染问题，还能变废为宝。

本发明就是将玉米酒精糟液作为主要原料，制成适于芽孢杆菌生长和发酵的培养基。不仅大大降低了培养基成本，而且为酒精糟液的综合利用开辟了新的途径。

(三)发明内容：

本发明目的在于提供一种芽孢杆菌培养基及培养方法。

本发明是以玉米酒精糟液为主要原料，适量添加K²⁺、Na⁺，制成适宜芽孢杆菌生长和发酵的培养基，及利用此培养基培养芽孢杆菌时的培养方法。

本发明是这样实现的：液体培养基成分为：调整酒精糟液COD含量至10000～20000mg/L，K₂HPO₄添加量为0～1％、NaCl添加量为0～1％，初始PH 3.5～7.0。斜面培养基需再添加琼脂1～2％。培养温度28～40℃，根据生长曲线培养时间为18～22h。液体培养时，接种量为1～5％，摇床转速120～150r/min，培养时间为18～22h。

(四)具体实施方式：

实施例1：蜡状芽孢杆菌

1、用营养肉汤培养基活化菌种：取蜡状芽孢杆菌斜面一只，将其在营养肉汤培养基中活化、扩大培养24h，备用。同时记活化液中活菌数。

2、酒精糟液的制备：将酒精糟离心处理，取上清液，备用。

3、酒精糟液液体培养基的配置：将离心获得的酒精糟液稀释至COD含量至12000mg/L，添加K₂HPO₄ 0.2％，添加NaCl 0.2％，溶解后，调PH值为6.0。分装三角瓶、封口。121℃，灭菌20min。备用。

4、酒精糟液斜面的配置：将离心获得的酒精糟液稀释至COD含量至12000mg/L，添加K₂HPO₄ 0.2％，添加NaCl 0.2％，溶解后，调PH值为6.0，再加入1.5％的琼脂，加热使之完全溶解。分装试管，封口。121℃，灭菌20min。取出后摆成斜面，备用。

5、液体培养：将步骤1的活化液，按接种量2％接种于步骤3的液体培养基中。培养条件为：30℃，摇床转速150r/min，培养20h。培养结束后，记培养液中的活菌数。

6、活菌计数对比表

  营养肉汤培养基  本发明酒精糟液培养基  活菌数(cfu/ml)  6.58×10⁸  6.49×10⁸

7、将步骤5培养的液体种子接于步骤4制备好的斜面培养基上。培养条件为：30℃，培养箱静止培养20h。冰箱4℃冷藏保存。

8、斜面保藏菌种的计数对比：

(1)将CM斜面培养基保藏的蜡状芽孢杆菌编号为1#，将本发明酒精糟液斜面培养基保藏的蜡状芽孢杆菌编号为2#，。分别在冰箱4℃冷藏保存的第7天、第14天、第21天、第30天进行活菌计数。

(2)计数方法为采用第三级种子计数。

(3)计数用培养基：