[发明专利]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体及其制备

权利要求书

1.一株抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.4651。

2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体，抗体亚型为IgA型。

3.权利要求2所述的单克隆抗体的制备方法，其制备过程如下：

根据猪高致病性繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中第32-65个氨基酸和第127-200个氨基酸设计两对引物，并在引物中引入12个氨基酸，即：SGGRGGSGGRGG，作为连接桥段，采用PCR的方法分别扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中第32-65个氨基酸基因序列及第127-200个氨基酸基因序列，这两段序列利用上述12个氨基酸作为连接桥段，连接成一个大片段；将上述连接片段产物酶切处理，克隆于携带谷胱甘肽转移酶的原核表达载体pGEX-6p-1中；测序鉴定，用异丙基硫代半乳糖苷对其进行诱导表达，得谷胱甘肽转移酶-GP5融合蛋白；用谷胱甘肽转移酶-GP5融合蛋白免疫Balb/c雌性小鼠，取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能够分泌对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白有反应性而对谷胱甘肽转移酶没有反应性的单克隆抗体的杂交瘤细胞，从杂交瘤细胞上清液中或从注射杂交瘤细胞后的动物腹水中获取单克隆抗体。

4.权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的两对引物序列为，第32-65个氨基酸的上游引物：TTCGAAT TCAGCAACAACAACAGCTCTCAT，下游引物：GCCGCCGCGGCCGCCGCTGCCGCCGCGGCCGCCGCTCTCCACTGCCCAGTCAAA；第127-200个氨基酸上游引物：AGCGGCGGCCGCGGCGGCAGCGGCGGCCGCGGCGGCCTTGCGAAGAACTGC，下游引物：TCGCTCGAG GAGACGACCCCATTG。

5.权利要求2所述的单克隆抗体在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒中的应用。