[发明专利]二氧化碳结合力的检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检验测定技术领域，更具体地说，涉及一种二氧化碳结合力的检测方法和试剂盒。

背景技术

二氧化碳结合力指血浆中碳酸氢根所含的二氧化碳的含量。血清或血浆中二氧化碳结合力含量测定是临床生化检验的常规项目，测定二氧化碳结合力可以了解人体内酸碱平衡的情况。呼吸性酸中毒，(肺气肿、肺纤维化)、呼吸肌麻痹、支气管扩张、气胸及呼吸道阻塞；代谢性碱中毒，例如呕吐、肾上腺皮质功能亢进、缺钾及服用碱性药物过多等都会引起酸碱中毒，从而使二氧化碳结合力增高；代谢性酸中毒，例如尿毒症、休克、糖尿酮症、严重腹泻及脱水；呼吸性碱中毒，例如呼吸中枢及呼吸加快等会引起二氧化碳结合力降低。因此，测定血清或血浆中的二氧化碳结合力含量，是输液疗法纠正失衡的重要指标，对治疗有重要意义。

目前，测定二氧化碳结合力的方法包括pH电极测定法、酸碱清空法和量压法等，量压法主要是采用瓦式呼吸机进行测定，即根据样品中的碳酸氢根与乳酸作用生成二氧化碳，在密闭的环境下，测定出二氧化碳的体积从而测算出碳酸氢根的含量，从而得到二氧化碳结合力。但是，上述方法测定操作误差较大，测定结果的准确度不高，很难作为医院常规检验项目开展。

随着各种半、全自动生化分析仪的普遍应用，近年来普遍采用磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)偶联的速率法(简称PEPC法)测定二氧化碳结合力。其反应原理为：

碳酸氢根与磷酸烯醇式丙酮酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的作用下生成草酰乙酸和磷酸；

草酰乙酸与还原型辅酶在苹果酸脱氢酶的作用下生成苹果酸和氧化型辅酶。

在PEPC法中，通过测定还原型辅酶的用量，测定碳酸氢根的含量，从而得到二氧化碳结合力。但是，空气中二氧化碳会与还原型辅酶发生反应，从而造成还原型辅酶下降；此外，待检测样品中内源性物质的增高，例如某些疾病会使血乳酸增高，从而使样品中乳酸脱氢酶含量增加，由于乳酸脱氢酶的作用，使还原型辅酶下降，影响检测二氧化碳结合力的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种二氧化碳结合力的检测方法和试剂盒，该检测方法能够准确检测二氧化碳结合力。

本发明提供了一种二氧化碳结合力的检测方法，包括：

步骤a)提供二氧化碳结合力的待检测样品；

步骤b)将所述待检测样品与检测液混合，反应，得到反应液，所述检测液包括pH值为4.8～5.2的Tris-HCl缓冲液、氯化钠、碳酸酐酶和显色剂；

步骤c)检测步骤b)得到的反应液在540～550nm波长下的吸光度值，计算得到二氧化碳结合力。

优选的，所述待检测样品为血清或肝素抗凝血浆。

优选的，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为10～50mmol/L。

优选的，所述检测液中氯化钠的浓度为150～160mmol/L。

优选的，所述检测液中碳酸酐酶的浓度为3000～5000U/L。

优选的，所述检测液中显色剂的浓度为120～500mg/L。

优选的，所述检测液还包括聚乙二醇6000、白蛋白和氯化钠。

本发明还提供一种试剂盒，包括：

pH值为4.8～5.2的Tris-HCl缓冲液、氯化钠、碳酸酐酶和显色剂。

9、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述碳酸酐酶的浓度为3500～4500U/L。

优选的，还包括标准液，所述标准液为40g/L的牛血白蛋白和26mmol/L的碳酸氢钠。

从上述的技术方案可以看出，本发明提供一种二氧化碳结合力的检测方法和试剂盒，该检测方法包括：将二氧化碳结合力的待检测样品与检测液混合，反应，得到反应液，所述检测液包括pH值为4.8～5.2的Tris-HCl缓冲液、氯化钠、碳酸酐酶和显色剂；检测所述反应液在540～550nm波长下的吸光度值，计算得到二氧化碳结合力。在检测过程中，所述待检测样品中的二氧化碳在碳酸酐酶的作用下生成碳酸氢根，从而使反应液的pH值升高，显色剂显色，然后通过检测所述反应液的吸光度值，计算得到二氧化碳结合力。与现有技术相比，本发明利用显色反应，无需使用还原型辅酶，检测的二氧化碳结合力具有很好的准确性。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种二氧化碳结合力的检测方法，包括：