[发明专利]一种药敏试剂盒的制备方法以及药敏检测方法

权利要求书

1. 一种药敏试剂盒的制备方法，其特征在于所述的药敏试盒包括装有增菌培养液的离心管、装有固体培养基的的培养皿以及药敏贮药圈；

装有增菌培养液的离心管的制备：

a、将重量配比为5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化纳倒入已装有600-1000份蒸馏水的烧杯中，搅拌均匀；

b、往烧杯中倒入盐酸或氢氧化纳，将烧杯中的溶液PH值调整到7.3±0.1，配制成增菌培养液；

c、将烧杯中的溶液倒入可调式分液器，通过可调式分液器将增菌培养液注入离心管内，将盖子旋上但不旋紧，留半圈至一圈；

d、将装有增菌培养液的离心管放在试管架上，再放入自动高压灭菌锅内，高压灭菌10-20分钟；

e、灭菌结束后将离心管取出，然后旋紧离心管的管盖，放入真包装袋内抽真空；

装有固体培养基的的培养皿的制备：

a、将重量配比为5-15份的蛋白胨、3-8份的酵母提取物、5-15份的氯化纳、10-15份的琼脂倒入已装有600-1000份蒸馏水的三角烧瓶中，搅拌均匀；

b、往三角烧瓶中倒入盐酸或氢氧化纳，将烧杯中的溶液PH值调整到7.3±0.1，制成培养液；

c、将三角烧瓶放入自动高压灭菌锅内，高压灭菌10-20分钟；

d、在超净台内对自动分液器的储液漏斗消毒，然后将冷却到55-65度的培养液倒入自动分液器的储液漏斗内，分装到培养皿中；

e、将培养皿平放于超净台上，并打到超净台紫外灯，使培养液冷却凝固成固体培养基；

f、将培养皿的盖子盖上，然后装入真空包装袋抽成真空；

药敏贮药圈的制备：

制作15-20种药物的药敏纸片，将药敏纸片粘贴于贮药圈的正面，然后装入真空包装袋抽成真空。

2.根据权利要求1所述的药敏试剂盒的制备方法，其特征在于在装有增菌培养液的离心管的制备的步骤b中加入海水晶或者浓缩海水后，调整盐度到24-28之间，pH6.8-7.2之间，配制成增菌培养液；在装有固体培养基的的培养皿的制备的步骤b中加入海水晶或者浓缩海水后，调整盐度到24-28之间，pH6.8-7.2之间，配制成培养液。

3.一种根据权利要求1和2制备的药敏试剂盒的药敏检测方法，其特征在于

a、准备：将手、剪刀和解剖容器清洗干净，并用75%医用酒精、水煮或火烧等形式对剪刀和解剖容器进行消毒；

b、取样：选病症典型的濒死鱼虾等个体，清水洗净解剖部位；用剪刀解剖，观察病变，再次消毒剪刀后，剪取约黄豆大小的典型病灶直接放入装有增菌培养液的离心管，并旋紧离心管管盖，若检测水样，则直接取5-10滴水样滴入装有增菌培养液的离心管内，并旋紧离心管管盖；

c、液体培养：用力振荡离心管数次后放置，且应避免阳光直射，之后每隔半个小时至1个小时用力振荡离心管数次，直到液体混浊；

d、涂布：将离心管内液体倒入装有固体培养基的培养皿中心部位，应避免倒入离心管底的沉淀物，然后用涂布棒轻轻地在固体培养基上将液体涂抹均匀，并应避免将固体培养基表面划破；

e、贴药敏贮药圈：将培养皿敞盖平放晾干，至表面基本干燥，然后取出药敏圈，将药敏纸片朝下放入培养盒中，轻压，使纸片与培养基表面充分接触，盖上培养皿的盖子后倒扣，静置于温度在20度以上的地方8-15小时；

f、结果判定：

1）、出现透明区的药敏贴片中的药物均可作为备选药物，透明区较大的药敏贴片中的药物可作为优选药物，综合考虑本类病害的常用药种类、用药史、药价、给药方式、进出口规定的因素，选出最合适的抗生素； 

2）、如未长出细菌或细菌呈斑点状散布，则表明病害可能不是由细菌感染引起；

3）、如细菌已布满整个培养盒，但未出现透明区，则表明在药敏贮药圈上的所有药敏贴片中的药物在标准使用剂量时对致病菌无效，建议其他产品重新进行选药。