[发明专利]用于检测人类EGFR基因20号基因外显子突变的引物组合物、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域和医学领域，具体地，本发明涉及一种用于检测人类EGFR基因20号基因外显子突变的引物组合物、试剂盒及方法。

背景技术

肺癌是较为常见的肺原发性恶性肿瘤，发病率和病死率较高，男性肺癌占各种癌病死因第一位，女性则仅次于乳腺癌占第二位。按传统的组织病理学分类，肺癌可分小细胞肺癌和非小细胞肺癌。非小细胞肺癌（Non-small-cell carcinoma ，NSCLC）即“非小细胞癌”，包括鳞癌、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚，非小细胞肺癌约占肺癌总数的80-85%。

上皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR）是上皮生长因子（EGF）细胞增殖和信号传导的受体。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR (ErbB-1), HER2/c-neu (ErbB-2), Her 3 (ErbB-3) 和 Her 4 (ErbB-4)。EGFR也被称作HER1、ErbB1，突变或过表达一般会引发肿瘤。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体。研究表明，EGFR突变基因与酪氨酸激酶抑制类药物使用有疗效关联，这些药物包括Iressa（易瑞沙）和Tarceva（特罗凯）。EGFR 基因突变影响着EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的临床疗效，目前发现EGFR基因突变90%以上的突变位于外显子19-21。EGFR外显子20的点突变或者碱基插入突变，点突变主要是790位密码子出现C-T转换，引起EGFR蛋白中该位点的氨基酸由苏氨酸转变突变为甲硫氨酸（T790M），仅见于药物治疗后复发者，突变使肿瘤对药物产生抗性。碱基插入突变发生在770-775位密码子，在GACAACCCCCACGTGTGTGC序列间，存在8种不同的插入方式，插入片段为3～9个碱基。

目前EGFR突变基因的检测方法有DNA测序法、特异性位点的聚合酶链式反应、荧光实时聚合酶链式反应、高效液相色谱法、毛细管电泳分析。相对于DNA测序，其它分子生物学方法尽管灵敏度和／或特异度有所提高，但是大多数方法仍对组织的取材要求较高，需要较多的肿瘤组织和有较高的肿瘤细胞含量。此外，有的方法，如荧光实时聚合酶链式反应、高效液相色谱和毛细管电泳等，需要特殊的仪器设备，因而仍然不能在临床上进行大范围推广。而聚合酶链式反应一单链构象多态性分析（PCR-SSCP），尽管只能做定性的分析，但通过条件优化，临床上可以作为一种初筛突变的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测人类EGFR基因20号基因外显子突变的引物组合物。

本发明的另一个目的是提供一种利用上述的引物组合物制备的试剂盒，以及该试剂盒在检测非小细胞肺癌药物疗效相关的EGFR基因20号基因外显子突变中的应用。

本发明的又一个目的是提供一种检测人类EGFR基因20号基因外显子突变的方法，该方法利用本发明提供的试剂盒进行检测，检测耗时少、灵敏度高、特异性好、检测结果稳定。

本发明的上述技术问题是通过以下技术方案得以实施的：

一种用于检测人类EGFR基因20号基因外显子突变的引物组合物，是由具有如下所述的核苷酸序列的引物组成：

5’- ACGTATTTTGAAACTCAAGATCGCA-3’ SEQ ID No：1,

5’- TCCAAAATAAAGGAATGTGTGTGTG-3’ SEQ ID No：2,

5’- AAGCCACACTGACGTGCCTCTC-3’ SEQ ID No：3,

5’- TAGTCCAGGAGGCAGCCGAA -3’ SEQ ID No：4。

该引物组合物包括用于检测EGFR 基因外显子20突变的引物，其中用于检测EGFR 基因外显子20的上游引物核苷酸序列为SEQ ID NO：1，下游引物核苷酸序列为SEQ ID NO：2，另外包含一条EGFR 基因外显子19内部的上游引物SEQ ID NO：3，下游SEQ ID No：4。