[发明专利]番茄溃疡病菌单克隆抗体制备方法及其试剂盒和使用方法

权利要求书

1.一种番茄溃疡病菌单克隆抗体的制备方法，其特征是：用密执安棒杆菌免疫BALB/C小鼠，以获得分泌产生该种细菌抗体的特异性的B淋巴细胞，将此B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，依次通过HAT、HT培养基筛选出针对番茄溃疡病菌阳性的杂交瘤细胞，用有限稀释克隆的方法进行克隆化培养，通过杂交瘤细胞体内诱导腹水产生和体外培养，制备大量单克隆抗体；进一步分离和纯化单克隆抗体，得到单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的番茄溃疡病菌单克隆抗体的试剂盒，其特征是：包括有①包被缓冲液稀释抗番茄溃疡病菌的单抗100-150uL；②待测样品包被酶标板100ul，以双蒸水为阴性对照；以CMM菌液100ul为阳性对照；③洗板，PBST洗涤4次，每次2min；④酶标抗体HRP羊抗鼠IgG，每孔100ul；⑤洗板，PBST洗涤4次，每次2min；⑥加TMB为3′，3′，5′，5′，-四甲基联苯胺显色液，每孔100ul。

3.如权利要求2所述的番茄溃疡病菌单克隆抗体的试剂盒的使用方法，其特征是：用包被缓冲液将抗番茄溃疡病菌的单抗作为一抗，稀释至1-10ug/mL，在酶标板反应孔中加0.1mL；然后加浓度为10^3-8cfu/mL稀释的待检样品0.1mL，同时做空白对照，以双蒸水为阴性对照；以CMM菌液100ul为阳性对照；再加酶标抗体HRP羊抗鼠IgG；再加底物液显色；最后终止反应于各反应孔中加入终止液0.1mL；测OD450/630值，并计算P/N值，N为标准品对照孔的OD值，P为竞争抑制物的OD值；重复3次，以测定值大于2.1者判定为阳性。