[发明专利]鸟苷的生产方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其是一种鸟苷的生产方法。

背景技术

鸟苷的用途十分广泛，是食品和医药产品的重要中间体，可用于合成食品增鲜剂——5’-鸟苷酸二钠 以及核苷类抗病毒药物如利巴韦林、阿昔洛韦等，也是用于制造无环鸟苷(Acyclovir)、三氮唑核苷(ATC)、三磷酸鸟苷钠(GTP)等药物的主要原料。

现在国内鸟苷生产主要采用枯草芽孢杆菌发酵法。鸟苷发酵可以采用分批发酵和补料分批发酵等形式。其中补料分批发酵由于可以降低发酵产物中底物浓度以及发酵粘度，解除底物抑制，提高营养成分利用率，从而有利于鸟苷的生成。在实际生产过程中被大多数厂家所采用。

现有菌种在补料分批发酵的情况下，产苷量为每升30克左右，产品的收率比较低。

发明内容

本发明针对上述技术中补料分批发酵产鸟苷的收率低的缺点，提出一种鸟苷的生产方法，该方法可以提高产鸟苷的收率，使得产苷量为每升30克左右提升到36克左右。

实现本发明目的的技术方案如下：

鸟苷的生产方法，包括配制种子培养基、培养种子、配制发酵培养基、接种发酵以及补料发酵，其具体步骤如下：

a、配制种子培养基，在水中按重量百分比加入葡萄糖2-4％、味精0.3-1％、蛋白胨0.5-1.5％、酵母浸出物粉0.5-1.5％、NaCl 0.2-0.3％、尿素0.1-0.3％、玉米浆0.5-1.5％，然后用NaOH和盐酸调节pH7.0-7.2，并110℃-120℃灭菌10-20分钟，得到种子培养基；

b、培养种子，将鸟苷生产菌接入种子培养基中，接种量为8％-15％，然后在33℃-35℃的温度下，保持pH值在6.5的条件下在5L的自动控制发酵罐中培养至对数期；

c、配制发酵培养基，在水中按重量百分比加入葡萄糖4.5-5.5％、味精0.8-1.2％、硫酸铵0.7-0.9％、酵母粉0.8-1.2％、硫酸镁0.3-0.45％、磷酸二氢钾0.15-0.25％、氯化钙0.15-0.25％、豆饼水解液1.5-3.3％、玉米浆1.5-1.9％，消泡剂0.03-0.05％，用NaOH和盐酸调节pH7.0-7.2，，并110℃-120℃灭菌10-20分钟，得到发酵培养基；

d、接种发酵，将步骤b中培养的种子按8％-15％的接种量接入含有发酵培养基的50L自动控制发酵罐中进行发酵，时间为8h，温度为0-4h为33.9-34.1℃，4-8h为34.9-35.1℃；

e、补料发酵，在d步骤中8h以后将温度控制在35.9-36.1℃，通过流加氨水将pH控制在6.5，溶解氧控制在40％，开始流加葡萄糖、酵母粉、豆饼水解液的水溶液，其中葡萄糖、酵母粉、豆饼水解液的重量分别为d步骤中接种发酵后的总发酵液重量的10％、0.6％、2％，流加时间为16h，结束后开始缓慢流加次黄嘌呤促进鸟苷生产，再过24小时结束生产。

所述的葡萄糖的水溶液的浓度为60％-70％。

本发明的优点与积极效果是1、通过降低发酵初始葡萄糖浓度和发酵温度，使从种子培养到发酵菌体生长环境不产生大的变化，有利于菌体生长；

2、通过前期葡萄糖与酵母粉的连续流加，在菌体生长过程中维持底物浓度不变的情况下使菌体浓度达到最大；

3、菌体完成之后立即开始流加次黄嘌呤，促进菌体生产鸟苷，使鸟苷产量得以提高。最终使发酵液中鸟苷浓度从30g/l提高到36g/l以上，发酵液中鸟苷浓度提高了20％。

具体实施方式

实施事例1，鸟苷的生产方法，包括配制种子培养基、培养种子、配制发酵培养基、接种发酵以及补料发酵，其具体步骤如下：

a、配制种子培养基，在水中按重量百分比加入葡萄糖2％、味精0.3-0.6％、蛋白胨0.5％、酵母浸出物粉0.5％、NaCl 0.2％、尿素0.1％、玉米浆0.5％，然后用NaOH和盐酸调节pH7.0，并110℃灭菌10分钟，得到种子培养基；

b、培养种子，将鸟苷生产菌接入种子培养基中，接种量为8％-10％，然后在33℃的温度下，保持pH值在6.5的条件下在5L的自动控制发酵罐中培养至对数期；

c、配制发酵培养基，在水中按重量百分比加入葡萄糖4.5％、味精0.8％、硫酸铵0.7％、酵母粉0.8％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾0.15％、氯化钙0.15％、豆饼水解液1.5％、玉米浆1.5％，消泡剂0.03％，用NaOH和盐酸调节pH7.0-7.2，，并110℃灭菌10分钟，得到发酵培养基；