[发明专利]兔出血症病毒荧光定量RT-PCR检测方法无效
| 申请号： | 201110062529.2 | 申请日： | 2011-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN102154512A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 贾广乐;苏国清;林祥梅;武昱孜;孙卫东 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100029 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 出血 病毒 荧光 定量 rt pcr 检测 方法 | ||
1.用于兔出血症病毒荧光定量RT-PCR检测的引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1和2所示。
2.用于兔出血症病毒荧光定量RT-PCR检测的TaqMan探针，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
3.如权利要求2所述的TaqMan探针，其特征在于，所述TaqMan探针的5’端的荧光基团为FAM，3’端的荧光猝灭基团为TAMRA。
4.含有如权利要求1所述的引物以及权利要求2或3所述TaqMan探针的兔出血症病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括扩增缓冲液、DNA聚合酶、反转录酶、RNA酶抑制剂和dNTPs。
6.一种兔出血症病毒荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取待测样品的RNA；
2)以步骤1)提取的RNA作为模板，用权利要求1所述引物和TaqMan探针，采用一步法RT-PCR方法进行荧光定量PCR检测，根据荧光定量扩增曲线判定样品检测结果。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤1)中所述样品为兔的肝组织、血液、分泌物或排泄物。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述样品为用福尔马林固定或石蜡包埋的兔的肝组织。
9.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中的RT-PCR反应体系为：
每25μL反应液中含有：2×Quant一步法荧光定量RT-PCR试剂盒12.5μL、2.5U/μL Hotmaster DNA聚合酶1μL、4U/μL Quant反转录酶0.35μL、10μmol/L的上下游引物各0.5μL、10μmol/L的探针0.5μL、RNA模板1μL，不含RNA酶的水补足至25μL。
10.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中的RT-PCR反应条件为：50℃、30min，92℃、3min，92℃、10s，56℃、20s，68℃、20s，40个循环。
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