[发明专利]月季花用于制备抗真菌产品的用途

说明书

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，是月季花用于制备抗真菌产品的用途。

背景技术

月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季的花，其根、叶也入药。月季花味甘、性温，入肝经，有活血调经、消肿解毒之功效。由于月季花的祛瘀、行气、止痛作用明显，故常被用于治疗月经不调、痛经等病症。未见其用于制备抗真菌产品的报道。

发明内容

本发明提供一种月季花用于制备抗真菌产品的用途。经体外细胞实验证实，其对对耐药真菌和其他真菌的生长有一定的抑制作用。因此月季花具有制备抗真菌产品的前景，用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。

发明效果：

本发明为月季花开辟了新的用途，在临床治病真菌耐药性日趋普遍，耐药程度日趋严重的情况，月季花对耐药真菌的生长有一定的抑制作用，具有良好的临床应用前景。

实施方式：

以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：月季花对不同临床真菌的作用

材料和方法

1.试药：

月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。提取过程：把粉碎后的药材粉末加入1000ml圆底烧瓶中，加入70％乙醇水浴回流2h，回流液过滤，放入已称重的烧瓶中，50℃左右减压旋蒸至粘稠浸膏状。在烧瓶中加入蒸馏水，加热使充分溶解(取出少许作为水提液，得到1g/ml的生药浓度)，再加入与蒸馏水等量的无水乙醇，加热充分混匀，合并提取液混匀，得0.5g/ml的生药浓度，取少许到EP管中做体外实验。

试药置于-20℃保存。实验前，将药物取出置于35℃温箱融化，充分混匀，分别进行药效学检验。

2.菌株：

临床株：耐药白念珠菌(100、904、953)，近平滑念珠菌(90018)，克柔念珠菌(4996)，热带念珠菌(2718)，均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。

所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30℃培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。

3.培养液：

RPMI 1640液体培养液：

RPMI1640(Gibco BRL)10g，NaHCO₃ 2.0g，吗啡啉丙磺酸(MOPS)(Sigma)34.5g(0.165M)，加三蒸水900ml溶解，1N NaOH调pH至7.0(25℃)，三蒸水定容至1000ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装后于4℃保存备用。

沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)：

蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。

YEPD培养液：

酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121℃，15min)后于4℃保存备用。

4.仪器设备：

Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)

隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)

THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)

SW-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)

5.菌液制备：

实验前，用接种圈从4℃保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌等球状菌少量，接种至1ml YEPD培养液，于30℃，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至1mlYEPD培养液中，用上述方法再次活化，16h后，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至1×10³～5×10³CFU/ml。

6.药敏板制备：

取无菌96孔板，于每排1号孔加RPMI 1640培养液200μl作空白对照；96孔板每排3～12号孔各加RPMI 1640培养液100μl；2号孔分别加RPMI 1640培养液180μl和640μg/ml抗真菌化合物溶液20μl，充分混匀；第一排为月季花提取物；第二排为质控氟康唑；