[发明专利]小分子RNA has-miR-29c在制备治疗肝癌的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉一个与HBV相关肝癌相关的小分子RNA has-miR-29c在抑制HBV感染和防止肝癌发生等方面的用途，属于生物技术研究领域。

背景技术

microRNAs(miRNAs)是一类普遍存在于真核生物中的非编码的内源性小RNA分子，其长度通常为21-25nt。迄今为止在人体中已经发现了数百种microRNA分子。miRNAs不编码蛋白质或多肽，而是通过与互补或部分互补的靶基因的mRNA的3’-UTR(3’非编码区)相互作用，使mRNA降解或介导其转译抑制，从而在基因表达调控中发挥重要作用^[1]。研究表明，miRNA通过在转录或翻译水平调节相关基因表达，参与发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程^[2-3]。

研究发现，miRNA的表达与多种肿瘤相关，如，miRNA通过调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌等高度相关。miRNA在肿瘤中的作用首次在B细胞慢性淋巴性白血病(CLL)中被证实，患者中有miR-15a和miR-16-1表达缺失或下调^[4]。另外miR-143和miR-145在结肠癌中表达下调^[5]。miR-155在Burkitt’s淋巴瘤和其它几种淋巴瘤中表达上调^[6]。Volinia等^[7]通过分析540例取自肺、胸部、胃、前列腺、结肠和胰腺等处的肿瘤样品，发现这些实体瘤有着不同的miRNA表达谱，说明miRNAs在实体瘤的发病过程中发挥着重要作用。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染引起急性或慢性乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是导致肝硬化、肝癌的重要原因。在我国HBV相关性肝细胞肝癌(HCC)发病率、死亡率均排名于疾病谱前列，严重危害人民健康^[8-9]。因此，阐明HBV感染和肝癌发生过程中的机体免疫应答和损伤以及基因表达与调控机制，是非常重要的科学问题。microRNAs的发现及其功能和调控机制的阐明为乙肝相关性肝癌的发生发展机制的研究提供一个新的方向。

Murakami等^[10]使用微阵列技术，对来自24个肝细胞癌(HCC)组织和22个临近正常组织(NT)的miRNAs表达谱进行分析，结果发现癌组织中miR-18、pre-miR-18和miR-224较正常组织有更高水平的表达，而miR-199a、miR-199a*、miR-195、miR-200a和miR-125a较正常组织有低水平表达。Meng等^[11]研究结果显示肝癌组织中miR-21的浓度比正常肝细胞高出9倍。更重要的是，他们发现miR-21可以直接调控抑癌基因PTEN的表达，影响其下游的磷酸激酶及基质金属蛋白酶，从而影响肝癌的增殖、转移和侵袭。一项最新研究则证实^[12]，miR-122a在HCC及其衍生的细胞系中表达下降约70％，miR-122a表达下降导致细胞周期性蛋白G1的过度表达是发病的重要病理机制。

然而，这些报道以HCV感染相关肝癌或非肝炎患者标本为研究对象，涉及HBV相关肝癌的报道的研究目前较少，因此有待于进行相关方面的研究。

有关miR-29在肿瘤中作用的研究报道还比较少。Fabbri等研究发现在肺癌细胞株中表达miR-29可以修复异常的DNA甲基化，诱导甲基化相关沉默肿瘤抑制基因的重新表达，抑制肿瘤生长^[13]。miR-29在胆管癌^[14]的发生发展中也具有调控作用，miR-29的表达上调会降低靶基因Mcl-1的表达，从而导致细胞耐药性的降低。另有研究发现，在慢性白血病患者的血样标本中，miR-29表达下调，miR-29作用于TCLlA(T-cellleukemia/lymphomalA)基因，低表达miR-29^[15]与慢性淋巴性白血病预后差有关。但是这些研究均没有涉及miR-29在HBV相关肝癌中的研究，因此进行相关研究具有重要意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明对小分子RNA has-miR-29c在HBV相关肝癌中的调控作用及其用法进行了研究，研究发现，其可作为抑制HBV感染和防止肝癌发生的调控分子，从而可以用于制备治疗肝癌的药物、抑制肝癌细胞生长的药物、抑制HBV感染的药物以及预防肝癌的药物或保健品。

本发明所涉及的小分子RNA has-miR-29c，其核苷酸序列如下：