[发明专利]一种加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于食品分析和环境检测中的加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒及其应用，属于药物残留分析和免疫分析技术领域。

背景技术

加替沙星(gatifloxacin)是日本杏林制药公司研制的第四代广谱氟喹诺酮类抗生素之一，于1999年12月获美国FDA(Food and Drug Administration)批准上市，于2003年3月在中国上市。加替沙星通过抑制DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的活性，来阻止细菌DNA合成和复制，产生快速杀菌的作用。它可以渗透至骨骼、肺、皮肤、中枢和泌尿等组织，其抗菌能力很强，对大肠杆菌、流感和副流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌等具有良好的抗菌效果。但其有一定的脂溶性，易引起神经系统的不良反应和血糖代谢混乱，特别是对一些糖尿病患者和胰岛素功能不良者慎用。鉴于此，为了保证动物和人类的健康，必须建立一套快速、方便、灵敏、有效的用于检测加替沙星的方法。

据报道，目前检测加替沙星的方法主要有：高效液相色谱法，紫外分光光度法以及酶联免疫法。其中高效液相色谱法是目前主要检测方法，该方法具有特异性强，灵敏高的特点，但其缺点也十分的明显，首先所用的仪器十分的昂贵和笨重，同时操作的人员必须具有相当高的科学素质，其次需要花大量的时间对样品进行前处理，处理时需要消耗大量有机试剂，使其不具备方便快速检测的特点。紫外分光光度法由于其检出限低没有被广泛的应用。酶联免疫法与其他的方法比，在具有高选择性和专一性的特点同时，可以现场进行大批量检测的特点，特别是电化学酶联分析检测，它把电化学分析的高灵敏度优势的也有效地融入酶联免疫法中。在电化学检测中，碳纤维电极是被认为是最具有生物兼容性的材料，对其研究也十分的透彻，生产工艺也十分的成熟。因此，以碳纤维为工作电极的电化学酶联免疫分析法是十分可行的途径，其具有广阔的市场、极高的经济价值和社会价值。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒及其应用。

一种加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒，包括包被有加替沙星包被抗原的酶标板、加替沙星多克隆抗体溶液、酶标二抗溶液和电活性物质溶液；

所述包被有加替沙星包被抗原的酶标板中的加替沙星包被抗原按照如下方法制备：由加替沙星通过碳化二亚胺活化酯与分子量范围是4.2Ka～4.8Ka的卵清蛋白偶联制得；

所述加替沙星多克隆抗体溶液中的加替沙星多克隆抗体按照如下方法制备：由加替沙星与分子量范围为6.7Ka～6.8Ka的牛血清白蛋白偶联所得的偶联物作为免疫原免疫动物新西兰大白兔制备得到；

所述的酶标二抗是用过碘酸钠将辣根过氧化物酶与羊抗兔抗体进行偶联制得。

所述包被有加替沙星包被抗原的酶标板中的酶标板为透明高吸附聚苯乙烯96孔酶标板，包被浓度为1.5μg/ml。

所述加替沙星多克隆抗体溶液的浓度为1∶8000～1∶16000；优选的，浓度为1∶10000。

优选的，所述酶标二抗溶液的浓度为1∶2000。

所述的电活性物质溶液是2mM对苯二酚和2mM双氧水的超纯水混合液。

所述的试剂盒中还包括加替沙星系列标准品溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、碳纤维工作电极。

所述加替沙星系列标准品溶液浓度分别为0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml。

所述浓缩磷酸盐缓冲液是每升含NaCl 80g、KH₂PO₄2.0g、Na₂HPO₄·12H₂O₂29.0g、KCl2.0g的水溶液。

所述浓缩洗涤液为含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.40.1mol/L的磷酸盐缓冲液。

所述的碳纤维工作电极工作电位为-0.15V。该工作电极与电化学工作站联用。

上述加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒在检测食品、饲料和动物尿样中叶酸加替沙星含量方面的应用。

本发明的优点和有益效果：

本发明所述加替沙星的电化学酶联免疫检测试剂盒以免疫学反应为基础，将抗原、抗体反应的高度特异性和酶对底物的高效催化同电化学高灵敏度有机的结合起来，通过测量反应的电流变化来检测加替沙星的含量。它具有灵敏度高、简便快速、准确的特点，可在检测食品、饲料和动物尿样中叶酸加替沙星含量方面发挥重要作用。

附图说明

图1为本发明加替沙星抗体的抑制率曲线。