[发明专利]一种可注射性心肌组织工程产品及其制备方法

权利要求书

1.一种基于多糖-多肽微球支架的可注射性心肌组织工程产品，其特征在于，该产品包括心肌细胞、壳聚糖-多肽和卡拉胶微球。

2.根据权利要求1一种基于多糖-多肽微球支架的可注射性心肌组织工程产品，其特征在于，所述卡拉胶微球的粒径为30-200μm。

3.一种基于多糖-多肽微球支架的可注射性心肌组织工程产品的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)壳聚糖-多肽复合物的制备

(a)称取一定量壳聚糖将其溶于1％-3％的乙酸中，制备成质量浓度为1％-5％壳聚糖的乙酸，搅拌直至全部溶解。

(b)称取1-4g功能性多肽溶与20ml去离子水肿，加入2-吗啉乙磺酸水合物搅拌活化半小时，然后将其加入到50ml壳聚糖溶液中混匀。

(c)加入碳化二亚胺和羟基琥珀酰亚胺并搅拌1-4小时，然后将其置于透析袋中透析72小时。

(d)将其放入低温冰箱中预冻12-48小时，然后冷冻干燥，获得壳聚糖-多肽复合物。

(2)壳聚糖-多肽微球的制备

(a)准确称取1-4g壳聚糖-多肽复合物溶于2％的醋酸中制得壳聚糖-多肽。

(b)将20-50ml液体石蜡，乙酸乙酯和span-80混合均匀。

(c)在100-2000r/min转速条件下缓慢将10-40ml壳聚糖-多肽溶液滴加到液体石蜡，乙酸乙酯和span-80的混合液中，并持续搅拌1-2小时，形成均一的乳液。

(d)在乳液中缓慢加入一定量的2.5％戊二醛，100-2000r/min转速条件下持续搅拌1-5小时。

(e)静置2-4小时后，离心，用甲醇、石油醚洗涤、去离子水依次洗涤数次，真空干燥，即可得到壳聚糖-多肽微球。

(f)Co₆₀灭菌备用。

(3)卡拉胶微球的制备

(a)准确称取1-4卡拉胶溶于去离子水中获得浓度为0.2-4％的卡拉胶。

(b)将适量的液体石蜡，乙酸乙酯和span-80混合均匀。

(c)在100-2000r/min转速条件下缓慢将20-50ml卡拉胶溶液滴加到液体石蜡，乙酸乙酯和span-80的混合液中，并持续搅拌1-2小时，形成均一的乳液。

(d)在乳液中缓慢加入2-10ml 0.1M的氯化钙，100-2000r/min转速条件下持续搅拌1-5小时。

(e)静置1-4小时后，离心，用甲醇、石油醚洗涤、去离子水依次洗涤数次，真空干燥，即可得到卡拉胶微球。

(f)Co₆₀灭菌备用。

(4)可注射性微球支架-细胞复合体的制备

(a)将0.5-2g壳聚糖-多肽微球分散到含有血清的10ml培养液中，然后利用该培养液接种心肌细胞，待细胞在微球上粘附后，离心，弃去上清液，备用。

(b)将卡拉胶微球分散到含有血清的培养液中，搅拌，获得一定卡拉胶微球浓度的悬浊液，备用。

(c)将粘附有细胞的壳聚糖-多肽微球按照一定的比例加入到卡拉胶微球悬液中，快速搅拌，获得可注射性微球支架-细胞复合体。

4.根据权利要求3所述一种基于多糖-多肽微球支架的可注射性心肌组织工程产品的制备方法，其特征在于，所述功能性多肽为谷胱甘肽或谷氨酰胺-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸五肽。