[发明专利]一种鸡传染性喉气管炎病毒gB基因与鸡白介素-18基因真核共表达载体

说明书

技术领域

本发明属动物医药生物工程技术领域，具体涉及一种鸡传染性喉气管炎病毒gB基因与鸡白介素-18基因真核共表达载体。

背景技术

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的一种急性上呼吸道接触性传染病，可造成鸡100%发病，死亡率为10%～40%，并且能严重影响蛋鸡的产蛋量。该病呈急性暴发和长期潜伏感染特性，分布于世界各地，是危害养禽业的重要疫症之一。

目前国内外预防鸡传染性喉气管炎病毒所用的疫苗都是弱毒疫苗，但所有的弱毒疫苗都存在以下缺点：l）由于该病毒的毒力与免疫原性呈正相关，因此，现用的疫苗毒力普遍偏强，接种后反应大；2）与ILTV强毒一样，其弱毒疫苗株也能引起潜伏感染，潜伏感染的鸡将终主带毒；3）疫苗病毒可以由接种鸡传染给非接种鸡，在鸡与鸡，鸡群与鸡群之间传插过程中毒力会返强，从而成为新的感染源；4）到目前为止尚无有效方法可以鉴别强毒株和弱毒株。

随着人们对疾病清除计划呼声的日渐高涨，特别是食品安全性意识的提高，研究新型安全且有效的疫苗用于ILT的防制十分必要。

发明内容

针对以上问题，本发明目的在于提供一种鸡传染性喉气管炎病毒gB基因与鸡白介素-18基因真核共表达载体。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案在于采用一种鸡传染性喉气管炎病毒gB基因与鸡白介素-18基因真核共表达载体，该载体是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因和鸡白介素18(IL-18)基因分别或同时插入真核双表达载体中构建而成。

所述的真核双表达载体为双顺反子质粒plRES。

所述的在鸡传染性喉气管炎病毒gB基因片段插入plRES启动子下游的MCSA的酶切位点XhoI与MluI之间，鸡白介素-18基因片段插入plRES启动子下游的MCSB的酶切位点SalI与NotI之间。

ILTV糖蛋白gB基因与单纯疤疹病毒I型（HSV-1）病毒gB基因是同源基因，且它与HSV-1糖蛋白gB一样是一种跨膜糖蛋白，是ILTV的主要保护性抗原基因，位于基因组UL区，包含在一个3kb的EcoRI酶切片段内，是病毒感染所必需的，与病毒吸附及穿入细胞有关，在病毒接触和进入宿主细胞时起关键作用。它还能诱导高水平的体液免疫和细胞免疫，由其制备的亚单位疫苗免疫鸡可100%抵抗ILTV强毒攻击而不引起发病，且对ILTV强毒复制也有抑制作用，是该病毒的主要保护性抗原基因。

细胞因子作为机体内细胞之间相互作用的主要介质，在机体的免疫应答、炎症反应、造血功能、胚胎发育及机体的生长发育等各个方面都起重要作用，同时细胞因子的分泌和释放以及它们之间的相互作用对机体抵御疾病和维持正常的生理平衡具有重要意义，因此，细胞因子的研究受到高度重视。

2000年首次报道鸡IL-18（ChickenIL-18，ChIL-18），由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能，因而鸡IL-18不仅在比较免疫学研究中具有重要意义，而且还有望成为一种可以应用于家禽养殖业的新型免疫佐剂和免疫治疗剂。余夏萌等用鸡白细胞介素18构建的真核表达质粒（pCI-IL-18）与传染性法氏囊病病毒（IBDV）多聚蛋白DNA疫苗分别免疫SPF鸡，研究发现，鸡IL-18能显著促进T、B淋巴细胞的增殖反应，增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的中和抗体水平，第5周用IBDV标准强毒株BC6/85攻击显示，鸡IL-18能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗对强毒攻击的保护。

本发明的有益效果：本发明制备得到的核酸疫苗免疫机体后，表达的gB糖蛋白可刺激机体产生针对鸡传染性喉气管炎病毒的免疫保护作用，而表达的鸡白介素-18可以发挥明显的免疫调节，两者协同作用增强免疫效果，避免两种质粒共同免疫时可能存在的细胞摄取不成比例问题，提高局部抗原提成效率，增强局部免疫应答强度，缩短免疫应答潜伏期。

附图说明

图1为真核共表达质粒pIRE/gB/IL-18载体的构建流程图；

图2为ILTVgB基因和鸡IL-18基因的PCR产物的凝胶琼脂糖电泳图， 1为ILTV gB基因PCR扩增后的电泳条带，3为阴性对照，m为DNA Marker DL2000，2为鸡IL-18基因PCR扩增后的电泳条带。

图3为重组质粒pIRE/gB/IL-18经PCR鉴定及NotI和SalI双酶切鉴定电泳图，1为经SalI单酶切后的电泳条带，2为经NotI和SalI双酶切后的电泳条带，3为以P1、P2为引物PCR扩增后的电泳条带；