[发明专利]一种柱层析分离检测技术及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种柱层析分离检测技术及其用途。

背景技术

柱层析技术是利用层析柱对生物分子进行分离和检测的技术，其中层析柱是其常用的主体结构。层析技术按层析的机理分为吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析、疏水层析等。吸附层析是利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异，达到分离鉴定的目的。分配层析是利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，使之分离。离子交换层析是利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同，使之分离。凝胶层析是利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同，使之分离。亲和层析是在一对有专一的相互作用的物质中，把其中之一联结在支持物上，用于纯化相对的另一物质，常见的亲和对有酶和抑制剂、抗原和抗体、配体和受体等。

柱层析技术是一中分离效率很高的分析分离手段与方法，它能够将各种性质极极其类似的物质分离开，它既可以用于少量物质的分析鉴定，又可用于大量物质的分离纯化制备。目前这种技术已广泛应用于科学研究与工业生产的多个领域，在石油、化工、医药卫生、生物科学、环境科学、农业科学等领域都发挥着十分重要的作用。在通常情况下，层析柱内先填充不溶性基质，即柱层析填料，形成固定相，将待分离检测样品以溶液形式加载到层析柱上进行吸附分离和洗脱，其中的液体部分为流动相。流动相在固定相中的流动速度和固定相的厚度直接影响其吸附分离效果。一般层析柱内固定相的高度和直径比选择，5:1-10:1或更大，所需要的固定相和待分离检测样品的用量都比较大或者是分离检测所需的时间长，不适宜于样品量小、待分离检测物质的浓度低的样品的快速分离检测。因此，开发一种适用于小样品、浓度低的样品的快速柱层析分离检测技术，不仅使用方便，同时也可显著提高工作效率，在检测和分析、分离的诸多领域具有重要的实用意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种柱层析检测技术及其用途，特别是一种适用于样品量小、待分离检测物质的浓度低的样品的快速柱层析分离检测技术。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案。

一种柱层析检测技术，具有如下特征：1）层析柱内固定相湿重总体积小于1毫升；2）层析柱内固定相高度和直径比小于5:1；3）流动相采用循环加载方式，以提高吸附量。所述的层析柱内固定相湿重总体积选择10微升-1毫升，优选10微升-0.5毫升，更优选10微升-0.25毫升，最优选20微升-0.15毫升。所述的层析柱内固定相高度和直径比选择0.1:1-5:1，优选0.1:1-3:1，更优选0.1:1-2:1，最优选0.1:1-1:1。层析柱内的固定相，即层析填料、层析介质，有凝胶颗粒和磁微粒。凝胶颗粒有葡聚糖凝胶系列的凝胶过滤填料和琼脂糖凝胶系列的凝胶过滤填料、葡聚糖凝胶系列的离子交换填料和琼脂糖凝胶系列的离子交换填料、疏水层析填料、亲和层析填料、纤维素类填料等，其中亲和层析填料在本发明技术中最为常用，有溴化氰活化琼脂糖凝胶介质（CNBr Sepharose FF）、NHS活化琼脂糖凝胶介质等。

所述的柱层析结构包括但不限于：1）刚性管道结构；2）非刚性管道结构；3）为预装柱；4）为使用前装载的柱状结构；5）为加有开关控制装置的管道结构；6）为出样端过滤截留出口易于被去除而使柱内固相填料易于移离柱层析结构进行下一级分析的柱状结构。刚性管道结构常见为实验室常用的两端接有接口或不接有接口的玻璃、有机玻璃、不锈钢等材质的层析柱，也包括为某些分析特制的硬质材料的柱状结构。非刚性管道结构多指塑料、橡胶、硅胶等材料制成的可以随意圈曲的管道结构，两端接有接口或不接有接口。本发明技术所采用的层析柱包括预装柱和使用前进行装载的层析柱，考虑使用的方便程度预装柱将作为优选，同时在预装柱上加建出样端截赌出口易于被去除而使柱内固定相易于转离柱层析结构。本发明技术所采用的层析柱其管道结构也是优选对象，在检测时层析填料被固定在管道的特定部位进行，分析完成后被排出管道，再进行新的分析检测。

所述的层析柱内固定相包括包括但不限于：1）凝胶微粒；2）磁微粒。其中凝胶颗粒为多种柱层析填料，常用亲和层析填料，磁微粒为适用于待检物特异性结合物，如抗体、抗原等，进行标记的磁性微粒。

所述的流动相采用循环加载方式包括重复加载方式和循环流动加载方式。当执行重复加载方式时，流动相在完成一次加样后的流出液再被加样，如此反复多次。当循环流动加载方式时，流动相加载后的流出液又返回到流动相内，如此不断循环一定的时间。

所述的柱层析检测技术在多种分析检测产品开发中的应用。有环境、临床、药物分析、食品和工业分析等多领域的检测产品。