[发明专利]旋毛虫Ts27基因、其编码蛋白及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种旋毛虫基因，具体涉及一种旋毛虫Ts27基因、其编码的蛋白，以及所述基因和蛋白的用途。

背景技术

旋毛形线虫(Trichinella spiralis，简称旋毛虫)，可感染人及150多种动物，它所引起的旋毛虫病是一种人畜共患寄生虫病，呈全球性分布，严重地威胁了人类健康并对畜牧业造成巨大经济损失。旋毛虫生活史简述如下：当人或动物宿主生食或半生食含旋毛虫囊包的肉类(猪肉、狗肉等)，囊包内幼虫在胃液、肠液作用下逸出并在小肠内发育为成虫。雌、雄虫交配后雌虫产新生幼虫。新生幼虫侵入肠粘膜淋巴管或静脉，随淋巴和血循环到达宿主横纹肌继续发育。旋毛虫的致病过程分为三期：侵入期、幼虫移行及囊包形成期，即在该虫生活史的每个环节均可使宿主致病。

旋毛虫病临床表现复杂多样，诊断较困难，给及时的治疗造成一定难度，因此该病的免疫诊断及预防成为当务之急。目前常用的旋毛虫病的诊断方法有两种：一种是病原学检查即肌肉活组织检查，从患者肌肉组织中查出旋毛虫幼虫是最准确的诊断方法。但因受摘取肌肉组织部位局限性的影响，在发病早期和轻度感染者肌肉活检阳性率不高。而且由于是有创检查，病人很难接受此种检查方法。第二种是血清学检查，检测IgG水平。用于检测抗旋毛虫抗体的血清学方法有间接血凝试验(IHAT)、间接荧光抗体试验(IFAT)、乳胶凝集试验(LAT)、免疫酶染色试验(IEST)、酶联免疫印渍技术(ELIB)及ELISA等。其中ELISA因其具有经济、检测方法标准化、敏感性比较稳定等优点，现在是常规检测旋毛虫感染的血清学方法。目前在ELISA检测中常用的抗原有肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory，ES)抗原、不同虫期虫体抗原或重组蛋白如53kDa和人工合成的泰威糖(tyvelose，3，6-双脱氧己糖)抗原等。但ES和虫体抗原与并殖吸虫、华支睾吸虫、日本血吸虫和囊尾蚴等存在交叉反应，故特异性较差。而重组蛋白虽然能够提高特异性，但其敏感性不高。

由于旋毛虫病原体不能在体外大量传代培养，限制了抗原的获取；加之旋毛虫抗原的复杂性、多样性，造成目前尚无很好的高敏感度高特异性的抗原作为诊断候选抗原。

发明内容

为了获得更好的诊断候选抗原，发明人通过大量的实验寻找并克隆了旋毛虫抗原新基因Ts27基因，通过重组表达和纯化获得了Ts27基因的重组蛋白，进一步获得了特异性抗体，并用实验证明Ts27基因编码蛋白具有良好的免疫原性和特异性。

本发明的一个方面涉及分离的多核苷酸分子，其含有选自以下的核苷酸序列：

a.SEQ ID NO：1所示序列或SEQ ID NO：1所示序列中的编码序列；

b.与a的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a的核苷酸序列不同的序列；

c.在高等严紧条件下能够与上述a或b的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；

d、对上述a或b所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；

e、与上述a或b所示核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列；和

f.与上述a～e所示序列互补的序列。

在本发明的一个实施方案中，为SEQ ID NO：1所示序列或其编码序列，即SEQ ID NO：1序列中第1位至第693位碱基所示的序列。

本发明的另一方面涉及分离的蛋白，其氨基酸序列由本发明的多核苷酸分子编码。

在本发明的一个实施方案中，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的另一方面涉及含有本发明多核苷酸分子的重组载体，和含有所述重组载体的重组细胞。在本发明的一个实施方案中，所述重组载体为将Ts27基因片段插入PET-28a(+)所获得的载体。在本发明的一个实施方案中，所述重组细胞为将本发明的重组载体转化入大肠杆菌BL21株所得到的细胞。

本发明的另一方面涉及抗体，其可特异性地结合本发明的蛋白，所述抗体可以为单克隆抗体或多克隆抗体。

所述单克隆或多克隆抗体可以通过本领域常规的免疫方法制备。例如可从被免疫动物的血清中得到和分离多克隆抗体，并使用常规方法试验其对抗原的特异性。或者，也可使用由培养的连续细胞系生产抗体分子的任何技术制备并分离单克隆抗体。

在本发明的一个实施方案中，将Ts27基因重组蛋白免疫小鼠，可以获得高滴度的抗体血清，得到针对Ts27基因编码蛋白的多克隆抗体。

本发明的另一方面涉及药物组合物，其含有本发明的蛋白，或者本发明所述的抗体，以及药学上可接受的载体。