[发明专利]胞二磷胆碱的制备方法

权利要求书

1.胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：使用单一的基因工程菌的培养物或者其处理物作为酶源，催化包括氯化铵、乳清酸和磷酸胆碱的底物进行反应，使得反应液中生成和积蓄胞二磷胆碱，从所述反应液中提取所述胞二磷胆碱。

2.根据权利要求1所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：所述基因工程菌具有可诱导表达磷酸胆碱转胞苷酰酶、乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶、核苷二磷酸激酶和胞苷三磷酸连接酶的基因。

3.根据权利要求2所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：可诱导表达所述磷酸胆碱转胞苷酰酶和胞苷三磷酸连接酶的基因位于所述基因工程菌的质粒上。

4.根据权利要求3所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：可诱导表达所述乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶和核苷二磷酸激酶的基因位于所述基因工程菌的染色体上。

5.根据权利要求4所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：可诱导表达所述磷酸胆碱转胞苷酰酶的基因核苷酸片段来源于酿酒酵母。

6.根据权利要求5所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：可诱导表达所述胞苷三磷酸连接酶、乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶和核苷二磷酸激酶的基因片段来源于大肠杆菌。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：所述基因工程菌的制备方法包括如下步骤：

a)将来源于酿酒酵母的可诱导表达所述磷酸胆碱转胞苷酰酶的基因核苷酸片段和来源于大肠杆菌的可诱导表达胞苷三磷酸连接酶的基因核苷酸片段经酶切后与质粒载体连接形成重组质粒；

b)通过同源重组将来源于大肠杆菌的可诱导表达所述乳清苷酸焦磷酸化酶、乳清苷酸脱羧酶、尿甘酸激酶和核苷二磷酸激酶的基因片段插入到宿主细胞的染色体上；

c)将所述重组质粒转入到所述宿主细胞内。

8.根据权利要求7所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：所述质粒载体为质粒pUC18。

9.根据权利要求8所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为原核细胞。

10.根据权利要求9所述的胞二磷胆碱的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。