[发明专利]一种多肽液相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽的合成，特别是涉及一种多肽液相合成方法。

背景技术

随着科技水平的提高和人类对多肽的重视与研发，越来越多的多肽药物被开发应用于临床，为提高人类健康水平和治疗、预防疾病，提供高效安全的新型药物和疫苗。随着人们对多肽药物的需求逐渐增加，对化学家，特别是药物化学家而言，如何高效合成廉价的多肽药物，是一个亟待解决的技术问题。多肽的化学合成已经成为获得多肽药物的最重要途径。目前，液相合成多肽是合成短肽及片段肽的非常高效廉价的制备手段，而结合固相合成和液相合成优点的片段缩合工艺，与液相合成多肽的方法相比，则更是廉价且高效。但是，采用传统的液相合成方法合成多肽时，除了必须使用保护氨基酸、缩合剂和反应溶剂(一般为有机溶剂)之外，还需要使用大量有机溶剂用于反应后的处理，常用的有机溶剂包括石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等，易污染环境。由于必须使用大量有机溶剂，不仅提高了多肽的生产成本，而且造成非常严重的环境污染，因此，如何降低液相合成多肽的成本和减少对环境的污染，是本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，提供一种多肽液相合成方法，能够大幅度降低多肽的生产成本，并减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。

本发明提供的多肽液相合成方法，包括以下步骤：将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。

在上述技术方案中，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脱除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。

在上述技术方案中，将脱除叔丁氧羰基(Boc)后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基(Boc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。

在上述技术方案中，将脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。

与现有技术相比，本发明的优点如下：

本发明避免大量使用有机溶剂进行反应后的处理，改用水作为析出保护多肽中间体的溶剂。本发明适用于规模化生产小分子多肽，不需大规模改变原有工艺，只需在合成环节中采用易溶于水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)作为反应溶剂，在脱除氨基保护基的过程中，选用易溶于水的三氟乙酸(TFA)来脱除叔丁氧羰基(Boc)，选用哌啶和DMF的混合溶液来脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。因此，本发明不仅能够大幅度降低多肽的生产成本，而且能够减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本发明实施例提供的多肽液相合成方法，包括以下步骤：将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。

其中，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脱除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。将脱除叔丁氧羰基(Boc)后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基(Boc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。将脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。

反应过程的具体实施通式如下：