[发明专利]团头鲂微卫星家系鉴定方法

权利要求书

1.一种团头鲂微卫星家系鉴定方法，其特征包括如下步骤：

1)将来自天然群体的团头鲂亲本进行人工繁殖，得到至少50个家系，待鱼苗孵出10天后，从每个家系中随机选取200尾鱼苗混合放入池塘中，作为用于亲子鉴定的家系群体；

2)选取步骤1)的团头鲂繁殖亲本的鳍条组织，提取基因组DNA，以DNA为模板，选用12对微卫星引物，对TTF01，TTF02，TTF03，TTF04，TTF05，TTF06，TTF08，TTF09，MAC31，MAC46，MAC50，MAC53共12个微卫星位点进行巢式PCR扩增；

3)步骤2)所述的巢式PCR扩增方法中PCR反应体系内包含3个引物：位点特异性正向引物，其5’末端加有M13通用序列；位点特异性反向引物；FAM、NED、HEX三种荧光标记的M13通用引物；PCR反应体系为6μL：50ng DNA，3μL JumpStart Red Mix(购自Sigma公司)，1.5pmol反向引物和1.5pmol的荧光标记通用引物，0.1pmol的含加尾序列的正向引物，100μM的亚精胺；

4)团头鲂繁殖亲本在12个微卫星位点的PCR产物经ABI 3730基因分析仪根据荧光标记进行基因型分析，使用P-LOCI软件模拟分析，筛选出适合鉴定团头鲂混养家系的有效微卫星位点9个TTF01，TTF02，TTF03，TTF04，TTF05，TTF08，MAC31，MAC46，MAC50；

5)将团头鲂子代混养1年后，随即选取182尾个体，剪取各个体的鳍条组织，提取个体基因组DNA，选取步骤4)中的9个有效微卫星位点，分析各子代的基因型；

6)根据亲本和子代在9个微卫星位点的基因型，对不同家系进行区分，鉴定子代个体的父母本；

其中

步骤2)所述的12对微卫星引物的核苷酸序列如下所示：

TTF01-F：CAGTCGGGCGTCATCATGGAGATGAAAGCTGAAGGAA(5’-3’)，

R：ATGCACGAACTGCCACATAA(5’-3’)；

TTF02-F：CAGTCGGGCGTCATCAAAACAGCTGCTACCCTTGGA(5’-3’，)

R：TTTGCCAGAAGAGCAAATCA(5’-3’)；

TTF03-F：CAGTCGGGCGTCATCAAAGACGCCACGGAAACTTTA(5’-3’)，

R：CTGACCGGATAGCAAAGTGA(5’-3’)；

TTF04-F：CAGTCGGGCGTCATCAGACTGGAGTCGTCAGGCTTC(5’-3’)，

R：TGCCCCACATTGTTAGACTG(5’-3’)；

TTF05-F：CAGTCGGGCGTCATCACTAGTGGGTAGGTGGCAGGT(5’-3’)，

R：TGACTGGGAGAGACAGAGGAG(5’-3’)；

TTF06-F：CAGTCGGGCGTCATCAGGCAGGTCAGGCACATTTAT(5’-3’)

R：TCTCTACCTCACATTCTCTCATTCT(5’-3’)；

TTF08-F：CAGTCGGGCGTCATCAGGGGAAATAAAGGGAGAAAGTG(5’-3’)

R：TTTCTCCTGATCCGTTGACC(5’-3’)；

TTF09-F：CAGTCGGGCGTCATCAAAGACGCCACGGAAACTTTA(5’-3’)，

R：GAGGTGGGACTGTGTGGAAT(5’-3’)；

MAC31-F：CAGTCGGGCGTCATCAGCATCGGTAACAGTCAAA(5’-3’)，

R：CAGGGATAATGTAGGAAGAA(5’-3’)；

MAC46-F：CAGTCGGGCGTCATCATACAAGAGCAGGTAAGCA(5’-3’)，

R：CAGCCACTGACTGAACAT(5’-3’)；

MAC50-F：CAGTCGGGCGTCATCAGGTATCGTGCTTGCTTGT(5’-3’)，

R：TTCCATTTAGAGCTACGG(5’-3’)；

MAC53-F：CAGTCGGGCGTCATCAAGCGGGTCTGTGCTAATC(5’-3’)，

R：CGGCCAGTTCCAAAGAGT(5’-3’)；

步骤3)所述通用引物M13的核苷酸序列如下：

M13：5’-CAGTCGGGCGTCATCA-3’。

2.权利要求1所述的方法在团头鲂家系标记辅助选择中的应用。