[发明专利]基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法

权利要求书

1.基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

A、预处理

将含有疟原虫子孢子的按蚊匀浆，对匀浆液离心，去除蚊组织碎片，收集上清液，获得含子孢子匀浆液，并用细胞计数器进行疟原虫子孢子计数;

B、纤维素柱纯化分离疟原虫子孢子

将步骤A所得子孢子匀浆液与缓冲液以体积比1:1-3的比例混合，获得子孢子匀浆稀释液，将所述子孢子匀浆稀释液在重力作用下过纤维素柱，流速为5-7 mL/min，收集洗脱液，所述洗脱液中含有疟原虫子孢子。

2.根据权利要求1所述的基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法，其特征在于：步骤B所述纤维素柱包括底部开孔（4）的中空柱体（1），柱体内从下至上依次填充有玻璃纤维层（2）和DE 52纤维素层（3）。

3.根据权利要求2所述的基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法，其特征在于：所述纤维素柱的DE 52纤维素层包括缓冲液和经过缓冲液充分浸泡的DE 52纤维素。

4.根据权利要求1所述的基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法，其特征在于，步骤A预处理具体为：将含有疟原虫子孢子的按蚊匀浆液经离心机离心,100rpm/3-4g离心30 秒，700-800rpm/25g离心5分钟，在2000-2500rpm/700g离心20分钟后，再以1:1-3置于199或DMEM培养基中,内含有体积浓度为35%牛白蛋白液，用细胞计数器对疟原虫子孢子进行计数，使疟原虫子孢子浓度为1×10⁵个/ml，即为获得的子孢子匀浆液。

5.根据权利要求1所述的基于纤维素柱的疟原虫子孢子分离方法，其特征在于，将步骤A所得子孢子匀浆液置于冰上，孵育至少30分钟，然后置于室温，与缓冲液以体积比1:1－3的比例混合，获得子孢子匀浆稀释液，将所述子孢子匀浆稀释液在重力作用下过纤维素柱进行纯化分离，在柱长80mm和直径16mm的纤维素柱, 流速为5-7ml/分钟，收集前段的洗脱液约30ml，所述洗脱液中含有纯化分离的疟原虫子孢子。