[发明专利]一种乙肝病毒核心抗原的核酸适配体序列及用途

说明书

技术领域

    本发明属分子免疫领域，涉及一种乙肝病毒核心抗原的核酸适配体的序列及其用途。

背景技术

乙型肝炎（乙肝）是严重危害我国人民健康的主要传染病，据世界卫生组织(WHO)统计，我国乙型肝炎病毒（乙肝病毒，HBV）携带者达1.3亿，肝病患者高达3000万，每年因各类肝病死亡人数达30万。肝病已经成为当今威胁中国人口健康的主要疾病之一，数量巨大的慢性肝病患者的存在，以及每年新发现肝炎病例的出现，对社会医疗资源造成极大的消耗。研究显示，乙肝病毒是乙型肝炎的主要致病原，病原明确。目前乙肝的治疗效果并不是很理想，临床实践显示乙肝病毒已对大部分治疗药物产生了耐药性，因此，亟待开发新的对抗乙肝病毒的治疗手段。

现有技术公开了乙肝病毒的DNA序列，其主要含有四个编码区，分别为S、P、C、X开放读框；其中，C开放读框编码核心抗原(HBcAg)，该核心抗原是诊断乙肝病毒感染的重要标志之一。有研究指出，对乙肝病毒自身生活周期密切相关的蛋白或酶进行干预是杀灭和抑制病毒的有效策略之一，也是未来诊断和治疗乙肝的理想方向。

目前，已知核酸适配体（aptamer）是经体外筛选技术筛选出的能特异结合金属离子、多肽、蛋白质乃至整个细胞的寡聚核苷酸（DNA或RNA）片段，其特异性如同抗体一样，对可结合的配体有严格的识别能力和高度的亲和力。核酸适配体的体外筛选技术被称为指数富集的配体系统进化（Systematic evolution of ligand by exponential enrichment，SELEX）技术，SELEX技术模拟自然进化过程，对随机寡核苷酸文库施加选择压力(结合靶目标)，淘选与靶目标高度特异结合片段（如图1所示）；相比抗体等多肽类的适配体（peptide aptamer），核酸适配体的优势相当明显，例如：制备简单快捷、化学性质稳定、至今未见报道存在免疫原性或毒性、靶分子范围广、亲和力高、特异性强、易于进行改造修饰等。

核酸适配体的诸多优势令其在基础研究、临床检测、新药开发等方面有着广泛的用途。在临床检测方面，目前能用抗原抗体反应进行检测的技术几乎都可以用核酸适配体替代，如Archemix公司开发的一种适配体分子传感器——RiboReporter^TM即可以将检测到的蛋白信号直接转化成光信号记录并分析，从而实现了对生物混合液(如血清、细胞提取物)中的大分子蛋白的直接快速检测。在新药开发方面，最典型的例子便是第一个通过美国FDA批准上市的核酸适配体药物Macugen。它是抗血管内皮细胞生长因子（VEGF）的核酸适配体，被用于治疗湿性老年性黄斑变性(wet AMD)。另一个核酸适配体药物的例子是由Aptamera公司研制的AGR0100。临床前试验表明，AGRO100对多种癌细胞均有抑制作用。

目前国内外大部分从事核酸适配体研究的科学家和生物技术公司主要针对心血管疾病，而较少关注中国人的常见疾病，如肝炎、肝癌、胃癌等，因此本发明拟考虑核酸适配体如何应用于上述严重威胁我国人民健康的重大疾病。就乙肝病毒来说，已有研究报道了针对乙肝病毒核心抗原的肽适配体，但迄今尚无针对乙肝病毒的核酸适配体的报道或公开。因此，开发针对乙肝病毒的核酸适配体，将为乙肝病毒的诊断和抗乙肝病毒治疗提供有力支持，具有重要的临床价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种乙肝病毒核心抗原的核酸适配体序列，具体涉及一种HBV核心抗原的核酸适配体中具有特异结合HBV核心抗原的特征序列。

本发明中，所述的HBV核心抗原的核酸适配体（序列1）中含有特异结合HBV核心抗原的特征序列，所述的特征序列为CATTT。

本发明中，所述的乙肝病毒核心抗原选自乙肝病毒株A、B、C、D、E、F、G、F、G或H 基因型。

本发明的进一步目的是提供所述核酸适配体序列的用途，根据对该序列分析，设计抗HBV感染的药物并进一步制备抗HBV感染的药物或制品。

本发明采用基因重组质粒表达核心抗原，并筛选与其特异结合的核酸适配体，制得具有特异结合HBV核心抗原的特征序列CATTT（本发明中命名为华山适配体1号，简称HSST01）。

通过以下技术方案实现：

采用已知的分子克隆技术，以含有双拷贝HBV基因组序列的重组质粒pBS_HBV3.6II （序列2）为基础，根据HBc基因序列设计引物：

HBc_L：5’-GCCCATATGGACATTGACCCGTA-3’；

HBc_R：5’-GCCCTCGAGTCAAACAACAGTAGTTT-3’；