[发明专利]一种异土木香内酯的提纯制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本专利申请是申请日为2008年7月10日、申请号为200810055376.7，发明名称为“一种异土木香内酯的提纯制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种化合物的提纯制备方法和其医药用途，具体地说是一种异土木香内酯的提纯制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术背景

土木香为菊科土木香(Inulahelenium L)的干燥根。土木香根中含有1-3％的挥发油，油中的主要成分为土木香内酯、异土木香内酯、二氢土木香内酯等。在传统医学中，土木香的功能主要为健脾和胃，行气解郁，止痛安胎。临床上主要用于治疗胸腹胀满疼痛，呕吐泄泻，痢疾，胎动不安。现代药理学研究已确认土木香挥发油具有抗菌，驱虫，镇痛，影响平滑肌、心血管的作用。在传统医学应用中，土木香的提取物通常为混合物，故其疗效不确切，毒副作用大。例如，土木香挥发油所含的土木香内酯及其衍生物均易溶于醇，故其提取物不纯且副作用多(详见中国医学科学院药物研究所等.中药志(第一册)〔M〕北京：人民卫生出版社，1979，86)。因此，长期以来人们一直都在致力于寻找更好的土木香有效成分的提纯制备方法，同时也在积极探索土木香有效成分的新医药用途。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种异土木香内酯的提纯制备方法，同时提供一种异土木香内酯的新的医药用途。

本发明的目的是这样实现的：

本发明所提供的异土木香内酯的提纯制备方法，包括以下步骤：

(a)以菊科旋覆花属植物土木香为原料，用90--99％的乙醇冷浸提取，过滤，滤液减压浓缩得浸膏；

(b)将浸膏悬浮在饱和的盐水中，使其浓度达到0.8-1.2g/ml，在60～90℃条件下，用石油醚萃取3次，萃取溶剂体积分别为相当于水溶液体积的2/3，1/2，1/3，合并石油醚萃取液，并用无水Na₂SO₄脱水后减压浓缩至近干，分别得石油醚提取物；

(c)采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱，洗脱液配比为10∶1，8∶2，6∶4，5∶5，最后依次用乙酸乙酯、甲醇冲柱至洗脱完全，洗脱液按体积接收，每份500mL，减压浓缩各流份，采用薄层色谱进行检测，按照薄层色谱结果将相同流份进行合并；在8-19流份得化合物异土木香内酯。

本发明方法中所用的倍半萜化合物异土木香内酯，其化学结构如下：

其波谱数据为：¹H-NMR δppm：6.13(1H，br.s，H-13a)，5.59(1H，br.s，H-13b)，4.77(1H，br.s，H-15a)，4.44(1H，br.s，H-15b)，4.50(1H，br.S，H-8)，2.99(1H，m，H-7)，2.34(1H，d，J＝12.0Hz，H-3b)，2.20(1H，d，J＝16.0Hz，H-9a)，2.01(1H，m，H-3a)，1.85(1H，J＝12.5Hz，H-5)，1.75(1H，o.m，H-6a)，1.71(1H，o.m，H-9b)，1.60(2H，o.m，H-2)，1.54(1H，o.m，H-1a)，1.40(1H，m，H-6b)，1.25(1H，m，H-1b)，0.83(3H，s，14-CH₃)。¹³C-NMR δppm：41.33(C-1)，22.68(C-2)，36.79(C-3)，148.97(C-4)，46.18(C-5)，27.45(C-6)，40.51(C-7)，76.82(C-8)，42.16(C-9)，34.26(C-10)，142.16(C-11)，170.67(C-12)，120.18(C-13)，17.65(C-14)，106.61(C-15)。

本发明方法制备的异土木香内酯其纯度高、晶型好、产量大。

试验表明，采用本发明方法提纯制备异土木香内酯，其纯度可达80--97％，产品收率与一般的醇提法相比可提高2-3倍。

本发明人经过长期大量的研究还发现了异土木香内酯的新的药理活性，从而完成了异土木香内酯在制备抗肿瘤药物中的应用的发明目的。

本发明所述异土木香内酯尤其适于在制备抗消化道肿瘤药物中应用。特别是在制备抑制消化道肿瘤细胞增殖药物中的应用。

本发明所述异土木香内酯的新的药理活性通过以下试验得到了验证。

试验用细胞株：