[发明专利]日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法

权利要求书

1.一种日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，操作程序为：首先提取日本蟳基因组DNA并稀释备用；再利用日本蟳基因组文库中的Jassr131微卫星核心序列，在其序列两端设计特异性引物；然后使用该引物对日本蟳不同地理群或群内个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶检测；利用产物出现的条带进行分析，确定每个个体的基因型，从而获得日本蟳在Jassr131核心序列区高度遗传变异的多态性图谱；Jassr131微卫星核心序列的特异性引物序列分别为：正链5’-CCAGGGAATTGAAACACT-3’，负链3’-TATGAAGGCTCTGCGAAA-5’，使用该引物时的退火温度为50℃。

2.按照权利要求1所述的日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，提取日本蟳基因组DNA，将其稀释为50ng/μL，每个PCR反应中加入3μL，反应总体积为20μL。

3.按照权利要求1或2所述的日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的加样参数为：每个PCR反应总体积为20μL，包括50ng日本蟳基因组DNA3μL；2.5mmol/L dNTP 1.6μL；含15mmol/L Mg²⁺的10×PCR Buffer2μL；5U/μL的Taq0.2μL；本发明的引物10mmol/L各1μL；最后加ddH₂O至20μL；使用该引物时设置PCR仪的程序参数为：95℃预变性5min；95℃变性45s，50℃退火45s，72℃延伸45s，35个循环；最后72℃再延伸10min；4℃保存。

4.按照权利要求1或2所述的的日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，对PCR产物的检测：将PCR产物在6％的变性聚丙烯酰胺凝胶，12W恒功率电泳1～1.5h进行分离；将胶板通过10％的冰醋酸溶液20min→蒸馏水6min→0.1％的硝酸银溶液25min→3％的碳酸钠溶液显色数分钟，终止反应即可得到日本蟳在Jassr131基因座位高度遗传变异的多态性图谱。

5.按照权利要求3所述的的日本蟳Jassr131微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，对PCR产物的检测：将PCR产物在6％的变性聚丙烯酰胺凝胶，12W恒功率电泳1～1.5h进行分离；将胶板通过10％的冰醋酸溶液20min→蒸馏水6min→0.1％的硝酸银溶液25min→3％的碳酸钠溶液显色数分钟，终止反应即可得到日本蟳在Jassr131基因座位高度遗传变异的多态性图谱。