[发明专利]超声波辅助花粉介导植物转基因方法

权利要求书

1.一种超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是以携带外源基因片段的农杆菌Ti质粒、大肠杆菌质粒或其它DNA载体为基因供体，以植物的雄配子体花粉为受体，在经过通气和低温处理的浓度为5—50%的蔗糖溶液中使花粉与DNA片段混合，通过超声波辅助作用使外源基因转移到受体花粉中；然后将花粉悬浮液略微静置后倒掉上清液，将并用细刷将沉淀的处理花粉授到植物柱头上，并在籽粒成熟时予以收获；在随后的生长季将转化处理花粉授粉后收获的种子播种，通过对萌发种子和幼苗的筛选，对成苗株样本DNA的PCR扩增及Southern杂交，进一步确定转化株。

2.根据权利要求1所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是所述的花粉是在0—4℃保存5天以内的花粉。

3.根据权利要求1所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是在加入花粉和外源DNA片段前对蔗糖溶液进行通气和低温处理，使用空气泵给蔗糖溶液连续通气20分钟以上，使蔗糖溶液中的空气含量达到饱和状态，同时将蔗糖溶液置于0—4℃冰浴或冰箱中预处理；加入花粉和外源DNA片段后，形成花粉悬浮液？，并在以后的操作过程中始终将该花粉悬浮液置于0—4℃冰浴中。

4.根据权利要求3所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是在加入外源DNA前后，分别对花粉悬浮液进行超声波处理，所用超声波功率为50—500W，每次处理时间为5秒—2分钟。

5.根据权利要求1所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是根据植物转化载体上携带的筛选标记基因利用筛选剂进行筛选。

6.根据权利要求1所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是根据插入的外源DNA序列利用PCR扩增或Southern杂交方法进行筛选。

7.根据权利要求1所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是对筛选到的转基因株系进行连续自交和筛选，直至获得稳定纯合的转基因品系。

8.根据权利要求5所述的超声波辅助花粉介导植物转基因方法，其特征是所用筛选剂为抗生素或除草剂。