[发明专利]菊花抗逆转录因子DgZFP1及其植物表达载体和构建方法及应用

权利要求书

1.菊花抗逆转录因子DgZFP1，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO. 1。

2.菊花抗逆转录因子DgZFP1基因植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的菊花‘钟山紫桂’抗逆转录因子DgZFP1与植物表达载体构成。

3.根据权利要求2所述的菊花抗逆转录因子DgZFP1基因植物表达载体，其特征在于所述的植物表达载体为BamHⅠ和KpnⅠ双酶切DgZFP1后插入到表达载体pCAMBIA 1301质粒进行重组反应得到。

4.权利要求3所述的菊花抗逆转录因子DgZFP1植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1）菊花‘钟山紫桂’抗逆转录因子DgZFP1的克隆

以提取的‘钟山紫桂’幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计引物扩增DgZFP1基因，

上游引物DgZFP1-F:  5′-ATGGCAGTTGAAGCTCTAAACTCAC-3′

下游引物DgZFP1-R:  5′-ATGTTGTGTCGGGATCTCGAGCTTT-3′

以反转录的cDNA为模板，进行聚合酶链式PCR反应，产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，进行序列测定；

2）植物表达载体pCAMBIA 1301-DgZFP1的构建

设计引物以菊花‘钟山紫桂’cDNA为模板，用高保真酶进行PCR反应，在DgZFP1基因的上游和下游分别引入BamH                                                和Kpn酶切位点，

上游引物DgZFP1-M-F: 5′- CGCGGATCCATGGCAGTTGAAGCTCTAAACTCAC -3′

下游引物DgZFP1-M-R: 5′- CGGGGTACCATGTTGTGTCGGGATCTCGAGCTTT -3′

PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒，BamH 和Kpn双酶切的DgZFP1片段与BamH 和Kpn双酶切的pCAMBIA 1301连接，转化，提取阳性质粒，酶切电泳检测并测序验证，植物表达载体pCAMBIA 1301-DgZFP1构建成功。

5.菊花抗逆转录因子DgZFP1在提高植物耐盐特性的应用。