[发明专利]一种人角膜上皮细胞系的构建方法

权利要求书

1.一种人角膜上皮细胞系的构建方法，其特征在于所述的构建方法是先将角膜取出后用含抗生素的消毒液消毒，再将角膜进行消化处理后，取下带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的角膜上皮组织块后，将角膜上皮组织块贴于培养孔的底部，使角膜上皮面向下；然后加入培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，培养期间换培养液，细胞长成单层后用胰酶消化法进行继代培养，培养至第60代完成了人角膜上皮细胞系的构建；其中，培养液为含有20％胎牛血清、0.02‰～0.04‰的人表皮细胞生长因子、0.01‰～0.02‰的人碱性成纤维细胞生长因子、0.4‰～1.0‰羧甲基壳寡糖和0.25‰～1‰硫酸软骨素的DMEM/F12培养液。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的培养液中还添加有0.08‰～0.1‰的IV型胶原。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的含抗生素的消毒液为用0.9％生理盐水配制的质量比浓度为20％～70％的庆大霉素溶液。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的角膜进行消化处理是用浓度为0.2～0.5％的胰蛋白酶溶液消化，消化时间为1～2min。

5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于上述的贴壁培养是先将贴有人角膜上皮组织块的培养孔中加入0.1～0.3mL的上述培养液，在二氧化碳培养箱中37℃下进行贴板培养12-24小时后，每个培养孔再补加培养液至1mL。