[发明专利]中国荷斯坦奶牛LHCGR基因作为分子标记的应用

说明书

技术领域

本发明涉及家畜具有突变位点的基因作为分子标记的应用，尤其涉及中国荷斯坦奶牛LHCGR基因作为分子标记在选育超数排卵奶牛中的应用。

背景技术

目前，在奶牛育种中的传统选择方法大多是基于个体的表型记录值，通过分析个体本身及其亲属的表型数据去评估该个体在某个性状上所具有的遗传优势。最近在对中国荷斯坦奶牛超数排卵性状进行分子标记辅助选择的研究中分别有Ke-Qiong Tang等(2010)和Wu-CaiYang等(2010)把基因INHA和FSHR作为超数排卵性状的分子标记。

由于传统的选择方法要等到个体生长到性成熟或之后才能获得超数排卵的数据，这样世代间隔较长，遗传育种的选择速度也就较慢。

超数排卵是一个数量性状，它除了受环境影响外，主要由多个基因控制，筛选出越多的相关基因越有利于选择的准确度和提高选择强度，但现在报道的仅有基因FSHR和INHA两个基因的突变与之相关。

发明内容

本发明的目的是提供一种中国荷斯坦奶牛LHCGR基因作为分子标记的应用。

中国荷斯坦奶牛LHCGR基因存在Reference SNP Cluster Report：rs41256848位点，当该位点纯合为“G”时，表现出超数排卵的优势。以此作为分子标记用于中国荷斯坦奶牛的辅助育种。

本发明的另一个目的是提供一种选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的方法。

本发明所提供的选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的方法，是检测待测中国荷斯坦奶牛LHCGR基因Reference SNP Cluster Report：rs41256848位点，确定待测中国荷斯坦奶牛LHCGR基因为GT、GG或TT型，以LHCGR基因为GG型的中国荷斯坦奶牛进行育种，获得较好超数排卵性状的中国荷斯坦奶牛；所述GG型为LHCGR基因ReferenceSNP Cluster Report：rs41256848位点是纯合G；所述TT型为LHCGR基因Reference SNP Cluster Report：rs41256848位点是纯合T；所述GT型为LHCGR基因Reference SNP Cluster Report：rs41256848位点是杂合T/G。

本发明选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的方法，可以通过提取中国荷斯坦奶牛基因组DNA，克隆LHCGR基因或包含LHCGR基因Reference SNP Cluster Report：rs41256848位点的部分片段，然后对该LHCGR基因或所述部分片段进行单链构象多态性检测或进行测序实现。

上述部分片段是以中国荷斯坦奶牛基因组DNA为模板，SEQ IDNo.1和2所示的DNA分子为引物对，进行PCR扩增获得的。

上述单链构象多态性(SSCP)检测中，LHCGR基因GG型为凝胶电泳显示有两条带，LHCGR基因TT型为凝胶电泳显示有两条带，LHCGR基因GG型的两条带在电泳过程中泳动速度小于LHCGR基因TT型的两条带；LHCGR基因TG型为凝胶电泳显示有四条带。

本发明的再一个目的是提供一种选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的引物对及专用试剂盒。

本发明选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1和2所示。

本发明的选育超数排卵的中国荷斯坦奶牛的专用试剂盒，含有上述的引物对。

除了上述引物对外，该试剂盒还可以含有进行PCR所需要的试剂，该试剂包括Taq DNA聚合酶、dNTP、PCR缓冲液、变性溶液等。

本发明通过对中国荷斯坦奶牛LHCGR基因进行分型，并将该分型与超数排卵性状进行相关性分析，确定中国荷斯坦奶牛超数排卵相关基因LHCGR基因可以作为分子标记选育出超数排卵的中国荷斯坦奶牛。本发明以分子标记辅助选择进行育种，可缩短世代间隔，提高育种进程。另外还可结合与奶牛超数排卵性状相关的其他分子标记位点，使得对奶牛选择更加精确。

附图说明

图1不同个体PCR产物SSCP分析结果。

图2三种基因型测序图谱。

图2中：A、B、C分别代表GT、GG、TT三种带型的测序图谱。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

用基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)从牛血液中提取奶牛基因组DNA。

奶牛LHCGR基因部分片段克隆：