[发明专利]检棒分析中改良的检测信号及捕获

说明书

本发明涉及改良检棒(dipstick)核酸检测的灵敏度，本发明的检棒用以测试样品溶液中目标核酸的存在，例如鉴定病患是否感染致病微生物，如砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)。

用于检测样品溶液中目标核酸存在的一些常规测试依赖利用聚合酶链式连锁反应(PCR)扩增目标核酸。此反应可检测小量的目标核酸，然而得到结果前需耗时数小时，但因通常希望可尽快得到结果，例如使病人等待的时间减至最少，故此为其显著缺点。这种方法的进一步缺点是需要昂贵的专家设备进行反应以及相当高成本的试剂。

相反，检棒可检测未扩增的目标核酸，不需任何专家设备且能比基于PCR的方法更快速地得到结果。病人就可于同时接受治疗，故特别有益于不喜欢或不能日后复诊的病人。检棒分析的成本也显著低于PCR基础的测试。

US 5,310,650所述的典型常规检棒中，单链DNA捕获探针固定于硝化纤维素滤器上远离过滤器末端(接触端)的捕获区。捕获探针序列互补于欲测目标核酸第一区域的序列。标记的单链DNA检测探针固定于硝化纤维素滤器上捕获区及滤器接触端间的探针区。检测探针含有互补于目标核酸第二区域序列(不同于第一区域)的序列。

在认为含有目标DNA的样品溶液中检测目标DNA时，将硝化纤维素滤器的接触端接触样品溶液。样品溶液通过毛细作用进入滤纸并经过探针区及捕获区。当样品溶液经过探针区时，可使检测探针移动并使其与样品溶液一起朝向捕获区上升。然后移动的检测探针能杂交到样品溶液中存在的任何目标DNA的第二区域。

当杂交的检测探针及目标DNA到达捕获区时，目标DNA的第一区域能杂交到固定的捕获探针。由此在目标核酸、捕获探针及标记的检测探针之间形成三重复合物。捕获区出现标记时说明样品溶液中存在 目标DNA。

至于第二类常规检棒，标记的DNA检测探针未固定于硝化纤维素滤器上，而是在允许检测探针杂交到样品溶液中任何目标核酸的条件下将检测探针加入到样品溶液中。然后将硝化纤维素滤器的接触端接触样品溶液且杂交检测探针的任何目标核酸在捕获区被捕获探针捕获。

然而，已发现常规检棒的核酸检测的灵敏度甚低，尤其当目标核酸为双链时。因此，在样品溶液中目标核酸的存在有时并不能被检测。认为环状双链目标核酸事实上并不能使用常规检棒测试检测，因此需要改进目标核酸的检棒检测灵敏度。

根据本发明的第一方面，其提供多种不同检测探针在检棒分析中的用途，以测试在样品溶液中目标核酸的存在，各检测探针能够杂交目标核酸的不同区域，由此允许利用检测探针检测目标核酸。

在此使用的术语“检棒分析”是指使用检棒的任何分析，其中样品溶液与检棒接触以使样品溶液通过毛细作用移至检棒的捕获带，由此允许样品溶液中的目标核酸于捕获带中被捕获并检测。

根据本发明的第一方面，其亦提供试剂盒以测试样品溶液中目标核酸的存在，其包含：

i)检棒，其包括：

层析片，其具有接触端以接触样品试剂；及

捕获部分，固定于层析片上远离接触端的捕获带，该捕获部分能够直接或间接结合目标核酸，及

ii)多种检测探针，各检测探针能够杂交目标核酸的不同区域，并由此允许利用检测探针检测目标核酸。

根据本发明的第一方面，其亦提供检棒用以测试样品溶液中目标核酸的存在，其包括：

层析片，其具有接触端以接触样品溶液；

固定于远离接触端的捕获带的捕获部分，该捕获部分能够直接或间接地结合目标核酸；及

多种检测探针，可释放地固定于层析片接触端与捕获带之间的探针带上，每一检测探针能够杂交目标核酸不同区域，由此允许利用检测探针检测目标核酸。

使用检测探针检测目标核酸，每一检测探针可包含标记，允许利用检测探针直接检测目标核酸，或每一检测探针可包含检测配体，允许利用检测探针间接检测目标核酸。每一检测探针可包含多种标记或多种检测配体。

如果检测探针包含检测配体，使用检测探针间接检测目标核酸可通过使用标记的检测配体结合部分而实现。在一些实施方案中，检测配体结合部分能被多重标记，例如多重标记的抗体能够结合检测配体。

在此使用的术语″层析片″是指通过毛细现象运送溶液的任何多孔带状物质。

本发明第一方面的检棒及试剂盒可用于检测目标核酸的方法中，其相似于上述那些常规检棒分析，在那些方法中，能够杂交目标核酸的捕获探针被固定于检棒的捕获带上。然而，通过一些其它的安排，目标核酸能被捕获至捕获带，而其亦在本发明的范围内。