[发明专利]用于检测亮蓝的方法及酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测亮蓝的方法及酶联免疫试剂盒。

背景技术

亮蓝合成色素是目前我国批准使用的六种食用合成色素之一，被广泛应用于食品、药品、化妆品、医疗器具、烟草、饲料、食用包装、日化品、玩具等领域。目前虽然对亮蓝这类非偶氮类的合成色素的危害性没有定论，但它们没有任何的营养价值，对人的身体健康也没有任何帮助，故要尽量不要食用。我国对亮蓝这类合成食用色素也有明确的食用规定，我国对在食品中添加合成色素也有严格的限制：含乳饮料，植物蛋白饮料，碳酸饮料，可食用动物肠衣类，胶原蛋白肠衣等的限量是0.025g/kg，可可制品、巧克力和巧克力制品、冷冻饮料、果冻、调味炼乳(包括甜炼乳、调味乳及其它使用了非乳原料的调制炼乳)等的限量是0.05g/kg，水果调味糖浆、果酱、半固体复合调味料等的限量是0.5g/kg。目前，亮蓝国家标准所采取的检测方法是薄层分析、分光光度计法以及高效液相分析法。这些方法虽能达到国家标准检测要求，但检测花费比较昂贵，且不能大批量快速的检测，不能满足市场上实地检测的要求。近年来，我国科研工作者在亮蓝检测方面做了大量的工作，但都主要集中在理化检测方面，文献检索尚未发现关于亮蓝的ELISA检测方法的报道，鉴于此，本发明研究和建立了亮蓝的竞争ELISA检测方法，制作和研制了亮蓝酶联免疫试剂盒及其检测方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测亮蓝的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的检测亮蓝的酶联免疫试剂盒，包括亮蓝半抗原和亮蓝的特异性抗体；所述特异性抗体为亮蓝的多克隆抗体或单克隆抗体；其中，所述半抗原和亮蓝的特异性抗体可以以下述任一种形式存在：

1)亮蓝半抗原与载体蛋白进行偶联，得到亮蓝半抗原与载体蛋白的偶联物(以下称为半抗原-载体蛋白偶联物)，将其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述试剂盒还可以既包括半抗原和亮蓝的特异性抗体，又包括抗抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；其中，所述半抗原和抗抗体以下述任一形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原-载体蛋白偶联物，将其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述亮蓝多克隆抗体或亮蓝单克隆抗体，均是用所述亮蓝半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白可为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白等。

所述单克隆抗体是通过杂交瘤细胞技术得到的。所述亮蓝多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。

为了方便检测，所述试剂盒还可包括酶标板，当所述亮蓝特异性抗体或抗抗体用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述亮蓝半抗原或亮蓝半抗原-载体蛋白偶联物；当所述半抗原用酶进行标记时，所述酶标板上包被有所述亮蓝特异性抗体或所述抗抗体。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还可包括亮蓝标准品溶液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液中的至少一种；

其中，所述浓缩洗涤液为pH值为6-9、含有在所述浓缩洗涤液中的终浓度为0.02-0.05％(质量百分含量)叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为1.0-2.0％(质量百分含量)吐温-20、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有在所述浓缩复溶液中的终浓度为5-10％(质量百分含量)的DMSO、pH为6-8、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

所述酶标记中所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液，所述终止液为1-2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液。当标记为碱性磷酸酶时，显色液为硝基磷酸盐缓冲液，终止液为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

所述浓缩洗涤液具体可以为pH值为7.4、含有在所述浓缩洗涤液中的终浓度0.03％防腐剂、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为1.50％的吐温-20、0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液具体可以为含有在所述浓缩复溶液中的终浓度为8％的DMSO、pH为7.4、0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述底物显色液为过氧化氢或过氧化脲、四甲基联苯胺硫酸盐混合溶液，所述终止液为2mol/L硫酸溶液或盐酸溶液。