[发明专利]杂交瘤细胞株4e9及其所产生的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种杂交瘤细胞株及其所产生的单克隆抗体，具体地本发明涉及一种杂交瘤细胞株4e9及其所产生的单克隆抗体4e9。

背景技术

中国专利公开号CN100587069C公开了名称为“人癌来源的Ig轻链可变区序列和CDR3序列以及它们的用途”。公开了Vκ4-1/J3组合序列及其抗体在制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物中的应用。针对该组合序列的应用，筛选到特异性高、抗肿瘤效果好的单克隆抗体，以在制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物中进行更好地应用，无疑是本领域技术人员所期望的。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性高、抗肿瘤效果好的能够识别Vκ4-1/J3组合序列的单克隆抗体以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了具有保藏号为CGMCC No.4572的杂交瘤细胞株4e9。

进一步，本发明提供了一种单克隆抗体4e9，其从具有保藏号为CGMCCNo.4572的杂交瘤细胞株4e9产生。

进一步，本发明的单克隆抗体4e9，其特征在于该单克隆抗体4e9特异性识别Vκ4-1/J3组合序列的Ig轻链。

进一步，本发明也提供了本发明的单克隆抗体4e9在制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物中的应用。

本发明保藏号为CGMCC No.4572的杂交瘤细胞株4e9产生的单克隆抗体4e9特异性高，抗肿瘤效果好，并且可以识别Vκ4-1/J3组合序列的Ig轻链。

本发明的杂交瘤细胞株4e9于2011年1月25日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏编号CGMCC No.4572。

附图说明

图1：单克隆抗体4e9的流式鉴定。

A列为商品化小鼠IgG2b(同型对照)，B列为单克隆抗体4e9；

①行为A549细胞胞内蛋白荧光染色，②行为A549细胞膜表面荧光染色；

③行为HT-29细胞胞内蛋白荧光染色，④行为HT-29细胞膜表面荧光染色。

图2：蛋白质谱分析鉴定单克隆抗体4e9特异性识别的蛋白。

图3：单克隆抗体4e9和商品化人Igκ单抗特异性识别多种肿瘤组织和正常人血清中的Igκ。

1.人结肠癌肿瘤组织；2.人骨肉瘤肿瘤组织；3.人结肠癌细胞系HT29在裸鼠体内成瘤的肿瘤组织；4.正常人血清。RIPA裂解液获得亲水性的肿瘤组织蛋白。尿素裂解液获得疏水性的肿瘤组织蛋白。

上图为单克隆抗体4e9的识别结果；下图为商品化人Igκ单抗的识别结果。

图4：多种肿瘤组织中单克隆抗体4e9和商品化人Igκ单抗免疫组化结果的比较研究。

图5：单克隆抗体4e9的抗肿瘤结果。其中该四格图中，左上方表示死亡细胞的百分比，右上方表示凋亡细胞的百分比，左下方表示存活细胞百分比，右下方表示早期凋亡细胞百分比。

图6：单克隆抗体4e9临床诊断多发性硬化症的应用。

为了更好地理解本发明，下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。该实施例仅仅是示例，本发明不限于该实施例。

本发明所用的生物材料、试剂、方法和仪器，如无特别说明，为本领域常规的生物材料、试剂、方法和仪器。本发明所涉及的生物材料、试剂、方法和仪器均可以通过商购途径购买。

具体实施方式

实施例1：杂交瘤细胞株4e9、其所产生的单克隆4e9的制备、纯化及鉴定

以原核重组蛋白(GST-Vκ4-1-J3)作为免疫原免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与NS-1细胞进行融合，经筛选、克隆化后获得1株(4e9)稳定分泌针对 Vκ4-1/J3型Igκ的抗体的杂交瘤细胞株。这株单抗的亚类为IgG2b。将腹水单抗经辛酸-硫酸铵沉淀法或经Protein G亲和层析纯化法获得高纯度的单抗。ELISA鉴定结果显示所得单抗均与原核重组蛋白(GST-Vκ4-1-J3)发生特异性结合，与常见的载体蛋白KLH、BC、BSA、OVA不发生交叉反应，同时与商品化的人IgG、羊IgG、兔IgG、鼠IgG均不反应。并对抗体进行了辣根过氧化物酶标记和FITC标记。通过ELISA及流式细胞术对抗体的效价及特异性经行了初步鉴定。

具体步骤如下：

1.材料和方法

1.1主要材料