[发明专利]一种制备高纯度磷脂酰胆碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备高纯度磷脂酰胆碱的方法。

背景技术

磷脂普遍存在于动植物的原生质和生物膜中，对生物膜的生理活性和机体的正常代谢有重要的调整功能，同时它具有良好的乳化性和抗氧化性，普遍应用于食品，医药，化妆品等领域。磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，简称PC)是其中重要的磷脂。

卵磷脂是构成人体细胞膜的主要成分，是保持细胞正常功能的生命基础物质之一，对人体的正常代谢有重要的调节作用。保持心脏和脑血管壁的弹性和渗透性，软化血管，增加高密度脂蛋白的含量，防止血液凝聚；使神经反应敏锐，提高记忆力，预防健忘和老年痴呆；可预防肝功能疾病和缓解糖尿病；可促进损伤细胞，提高机体免疫力。卵磷脂的缺乏是造成现代文明病的主要原因之一。

卵磷脂分子结构中同时具有亲水基和疏水基，这种双极性质使卵磷脂表现出优良的表面活性，属于应用较广泛的磷酸型两性表面活性剂，具有乳化，增稠，稳定，分散，增溶，润湿，润滑等功能，可广泛用于食品，饲料，医药，化妆品，涂料，油墨，纺织，皮革，石油制品及植物保护等工农业生产。高纯度卵磷脂是指PC含量大于90％的卵磷脂产物。由于高纯度卵磷脂纯度高，无异味，乳化能力强，不仅在食品工业中可较大量的添加使用，还可做成保健品，医药品等。尤其在医药上，可用作静脉注射的脂质体，用作活性组分的载体，降低毒性，增加药效。同时高含量的磷脂酰胆碱有预防肝炎和脂肪肝的作用，降低胆固醇，预防心血管疾病的作用。

目前制备高纯度的天然卵磷脂的原料主要来源于动物和植物。前者主要是蛋黄和动物组织，后者为一些植物油料，如大豆、菜籽。从蛋黄中提取高纯度卵磷脂的质量较好，但成本高。而植物油料中的磷脂是一种脂肪伴随物，随着油脂的提取而溶出，在油脂精炼的水化工序中作为油脚与油脂分离。这些油脚如不及时处理，极易滋生微生物而造成环境污染。油脚先经过脱水，得到浓缩磷脂，即植物来源的粗磷脂。植物来源的粗磷脂除了含磷脂酰胆碱以外，还含有甘油酯，单甘油酸三酯，二甘油酸酯，甘油酸三酯(这里指油类)，肽类，氨基酸，硬脂酸甘油酯，磷脂酰肌醇酯，磷脂酰乙醇胺，和碳水化合物。一般获得高纯度磷脂酰胆碱是以这样的粗磷脂为起始原料的。一般纯化磷脂的第一步是用丙酮脱油(U.S.Pat.No.3,268,335)，然后第二步是用乙醇提取(U.S.Pat.No.2,724,649)，第三步是溶解于乙醇部分的磷脂进行吸附层析，不超过35℃。在应用丙酮方法分离油时，产生了丙酮衍生物，如异丙叉丙酮，双丙酮醇，佛尔酮等其它的物质产生。这些副产物不但气味难闻，而且是有毒的。并且，在用丙酮脱油时产生的过氧化物对人体生理也会造成不好的影响。另外，工业生产丙酮的大量使用，存在安全隐患。

在纯化磷脂酰胆碱时，去除溶血磷脂酰胆碱也一直是生产注射级磷脂酰胆碱的难题。溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine)，是卵磷脂被磷脂酶A水解生成的一种化合物，有强溶血作用，主要是通过破坏细胞膜，引起溶血。注射液中溶血磷脂酰胆碱的存在，引起病人出现溶血的征兆，危及生命。

高纯磷脂酰胆碱制备技术主要有：乙酰化法、无机盐沉淀法、超临界流体提取法、膜分离法、薄层色谱法(TCL)、高效液相色谱法(HPLC)、柱色谱法等。无机盐沉淀法和乙酰化法只能获得磷酰胆碱，由于加入了反应试剂，后处理的技术难度加大；超临界流体法中较常用的是超临界CO2，它溶油能力较强而溶解磷脂的能力较弱，只适合制备混合磷脂产物而不适合于磷脂的分级分离，且设备费用比较昂贵；膜分离法的设备费用也较高，实现磷脂的单一成分分级分离也存在着一定的困难；薄层色谱法(TCL)和高效液相色谱法(HPLC)均可获得纯度高、质量好的单一磷脂产物，但HPLC法的处理量不大，且设备及维护费用较高，而薄层色谱法不易更换展开剂，后处理较繁琐；

这些方法不足以除去对人体有害的溶血磷脂酰胆碱，同时所用原料，一般通过用丙酮去除油脂，才能使磷脂酰胆碱的含量达到90％以上，费时费力，生产的产品中的溶血磷脂酰胆碱和丙酮的副产物得不到有效的控制，难以满足作为注射级磷脂的基本要求。

此外，部分制备高纯度磷脂酰胆碱的工艺中，用到有毒试剂，如CN1709895A，用到乙酸乙酯，且硅胶需要活化，操作十分繁琐。

发明内容