[发明专利]胶体金层析法抗核小体抗体检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗核小体抗体的试纸及其制备方法。

背景技术

核小体(nucleosome)是染色体的基本结构单位，是由DNA和组蛋白共同构成。组蛋白分子共有5种，分别称为H1、H2A、H2B、H3和H4。组蛋白H2A、H2B、H3和H4各两分子共同构成了核小体的核心，称为组蛋白八聚体，又称核心组蛋白。

核小体在生物活体中的唯一来源是凋亡细胞；当细胞发生凋亡时，凋亡细胞核内的DNA在内源性核酸内切酶的作用下以特有的例解方式，使核小体的连接区被切开成180～200bp或其倍数的寡聚核苷酸片段：这些DNA片段和寡聚核小体形成凋亡小体；正常生理情况下，凋亡小体可迅速被吞噬细胞或邻近细胞吞噬；当细胞凋亡率加快，凋亡小体不能被及时清除，其内含的核小体释放入血，刺激机体产生多种自身抗体已有报道。(龚宝琪抗核小体抗体与系统性红斑狼疮相关性的研究进展。[J]国外医学内科科学分册，2006(4)，33(4)：154-157)

抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体是SLE的标记抗体，因其阳性率低，故敏感性较差，抗ds-DNA抗体阳性率为30％～40％(苏茵，韩蕾，栗战国，等.[J].中华风湿病学杂志.2003，7(8)：474477.)，抗Sm抗体为20％～40％；而AnuA的阳性率为55％～75％、H显著高于抗ds.DNA抗体和抗Sm抗体。因其有较高的特异性，故可认为是一种用于SLE诊断的新的特异性抗体。文献报道，AnuA在抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者中有很高的阳性率(可达60％～65％)，因此AnuA对抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者更有诊断价值。(Bruns A，Blass S，Hausdorf G，et al.[J]Arthritis Rheum，2000，43：2307-2315.)核小体抗体是SLE的诊断标记，其诊断灵敏度为70-90％。在SLE的活性期，此抗体的检出率几乎为100％，在非活动期的SLE中为62％(相应的dsDNA抗体检出率仅为3.3％)(Min DJ，Kim SJ，Pank SH，et al.[J].Clin Exp Rheunlatol，2002，20(1)：13-18.)。因此，核小体抗体对SLE的诊断灵敏度高于dsDNA抗体，抗核小体抗体甚至可在dsDNA抗体阴性的病人中检测到。尽管如此，抗核小体抗体阴性的病人中也可能dsDNA抗体阳性。(Chairns Ap，McMillanSA，Crockard AD.et al[J]Ann Rheum Dis，2003，62(3)：272-273.)

核小体抗体也可在药物诱导的狼疮病人中检测到。它们是SLE恶化的早期标记，因为它们比dsDNA抗体更早出现。

抗核小体抗体在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95％，特异性几乎为100％。核小体是细胞染色体的功能亚单位，由DNA和组蛋白以特殊的方式组成。抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期，在系统性红斑狼疮的诱导和致病中有重要作用。临床资料显示，有15-19％的抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中抗核小体抗体阳性。因此联合检测抗dsDNA及抗核小体抗体可提高SLE血清学检出率。AnuA对SLE诊断的敏感性高，特异性强，可能是SLE诊断的标记性抗体之一；特别是对抗ds.DNA抗体、抗Snl抗体阴性的SI E的诊断具有重要意义

在SLE中核小体诱导的自身免疫反应主要是与AnnA结合而产生的。由活化的B细胞产生的AnuA可与核小体特异性结合发挥作用，并不与其成分中的DNA或组蛋白反应，且先于ds.DNA抗体和抗组蛋白抗体的形成。。

本发明采用大肠杆菌原核表达人源基因工程方法核小体，即为本发明的检测抗原。

目前实验室常用的检测抗核小体抗体的方法主要有酶联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、间接免疫荧光法(indirect immunoflurescence，IFF)、免疫印迹法(immunoblotting test，IBT)、线性免疫分析法(Line immuno assay，LIA)等。

免疫印迹法虽综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，且试剂具有较强的毒性和污染性。

间接免疫荧光法可作半定量测定，但需有荧光显微镜观察结果，结果判定的客观性不足，标准化困难，技术程序比较复杂，也不适合高通量标本的检测。