[发明专利]MD昆虫抗菌肽中间体生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌肽的生产方法，尤其涉及一种MD昆虫抗菌肽中间体的生产方法。

背景技术

昆虫是自然界中最大的一个生物类群，人类通过观察发现，在无论怎么样的生态环境中都分布有各种各样的昆虫。为何在多么恶劣的环境下昆虫都能生存下去呢？经过研究，人们发现昆虫在受到刺激或感染之后，在其血淋巴中会产生一种抗菌类物质，称抗菌肽。抗菌肽具有分子小、稳定性好、广谱抗菌、无毒副作用等特点，是昆虫能够抵御自然界有害微生物侵袭的重要因素。而昆虫抗菌肽中又以MD昆虫抗菌肽最为有效，MD昆虫是家蝇Musca domestica的简称，取拉丁学名中的属名和种名的第一个字母。家蝇与病原微生物有着密切接触的习性，却对病原微生物应有很强的抵抗力。王远程等科学家于1997年的《微生物学报》中所发表的《家蝇幼虫抗菌物质组成及其理化性质》一文中已经表明发现家蝇存在抗菌物质，而且MD昆虫抗菌肽在农业、医药、食品等领域有广泛的应用前景。

其后又有人对家蝇抗菌肽进行了分离。《中国媒介生物学及控制杂志》2006年10月第17卷第5期《昆虫抗菌肽两种提取方法的比较》一文中就公开了对家蝇幼虫采用针刺感染大肠埃希菌诱导产生抗菌肽，经研磨、层析提取其抗菌肽，并通过流式细胞仪测定用生理盐水或磷酸缓冲液两种方法进行处理。

此外，根据申请人检索了解到的目前国内对MD昆虫抗菌肽的诱导分离工艺还有以下几种：

可见，现有技术中对于MD昆虫抗菌肽的提取是有着相当成熟的技术的，但是缺点却在于生产成本高，工艺精度要求高。大部分的MD昆虫抗菌肽的提取都是在实验室完成，无法进行工业上的产业化规模生产。这样也导致了MD昆虫抗菌肽的价格偏高，无法付诸于实际临床使用，无法造福于人类。而且在MD昆虫抗菌肽的生产过程中，除了最终产物外，许多中间产物都被浪费掉，造成了很大的损失，相对地提高了生产的成本。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种MD昆虫抗菌肽中间体的生产方法，减少生产工艺中的浪费，简化生产工艺，降低生产成本，使得MD昆虫抗菌肽中间体能工业化生产。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：MD昆虫抗菌肽中间体生产方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将MD昆虫制成MD昆虫干粉；

(2)将经过(1)步骤所得到的MD昆虫干粉提取MD昆虫活性蛋白中间体；

(3)将经过(2)步骤所得到的MD昆虫活性蛋白中间体分离出MD昆虫小分子生物活性肽中间体；

(4)对经过步骤(3)所得到的MD小分子活性肽中间体溶于去离子水中；

(5)将(4)步骤中生成的溶液加在以乙醚基作为配基的疏水梯度及吸附树脂柱上；

(6)将(5)步骤中所述的疏水梯度及吸附树脂柱调节好流量，通过二元梯度泵以不同梯度洗脱液洗脱；

(7)将经过(6)步骤的洗脱液分部收集，各组分真空蒸馏脱乙醇；

(8)将(7)步骤中产物送到冻干机分别冻干得到多种MD昆虫抗菌肽中间体；

(9)将各步骤中的废水采用改进型的微生物吸附法处理。

优选的，所述(4)步骤中采用的去离子水电阻率≥17.5兆欧，使用量的比例是：1000克小分子活性肽中间体使用5000-8000克去离子水。选用这样的去离子水以及配比使得足够多的MD小分子活性肽中间体能充分溶于去离子水中。

优选的，所述(6)步骤中采用的洗脱液包括流动相A和流动相B，其中流动相A的成分为2.5mol/L硫酸铵、45mmol/L磷酸二氢钾和摩尔百分比70％的乙醇，流动相B为45mmol/L磷酸二氢钾和摩尔百分比50％的乙醇。携带组分向前移动的物质称为流动相，与固定相处于平衡状态。各个流动相中浓度根据疏水程度来确定浓度与疏水程度，疏水就是疏远水分子。蛋白质和多肽中含有疏水性氨基酸，这些酸水性氨基酸所带的疏水基因倾向于成簇或成团排列。疏水作用层析就是根据蛋白质和多肽分子表面疏水性的差异分离它们。洗脱液不是一直用一个浓度，而是通过不同的流动相逐渐升高浓度或是逐渐降低浓度，这种效果用二元梯度泵实现。

优选的，所述(6)步骤中的流速为4mL/min-5.5mL/min。

优选的，所述(7)步骤中各组分真空蒸馏脱乙醇具体步骤为：夹套不锈钢真空蒸馏器脱乙醇，通过控制80℃-85℃和真空度0.05Mpa——0.06Mpa收集乙醇，得到脱乙醇的液体。

优选的，所述乙醇循环使用。这样能减少生产成本。