[发明专利]一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法

权利要求书

1.一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（一）材料的嫁接复壮：首先是将秋季、早春收集的在冬季经过室内沙藏处理的白花泡桐优树枝条进行嫁接，嫁接方式采用芽接或枝接进行，砧木采用川泡桐无性系；

（二）组织培养和试管嫁接幼化：4月中旬至8月底采集优树嫁接材料萌发的嫩枝进行组织培养和试管嫁接幼化，其过程包括以下几个步骤：

第一步、外植体灭菌：采集经嫁接复壮过的白花泡桐优树带腋芽茎段作为外植体，用洗洁精将嫩枝表面清洗干净，然后放在超净工作台上，进行表面灭菌，灭菌时，先用75%的酒精浸泡8～10秒后，快速用无菌水冲洗2～3次，再用0.1%～0.12%的氯化汞溶液浸泡5～8分钟后，用无菌水冲洗3次，倒出无菌水，然后用无菌滤纸吸干材料表面的水，再用100μg/mL氨苄青霉素浸泡3分钟；

第二步、初代培养：经表面灭菌后的外植体材料经适当剪切处理后，接种到初代培养基中进行培养，培养条件为室温25～28℃，光照强度2000～5000lux，光照时间每天8:00～20:00，初代培养5～8天后转接到相同培养基继续培养10～15天；

第三步、试管嫁接幼化：切取初代培养萌发的嫩芽作为接穗，以建始桐3号为砧木进行无菌嫁接，嫁接方式采用劈接进行，嫁接后转接到嫁接幼化培养基中进行培养，培养条件同初代培养，培养10～15天，剪除砧木上的萌芽，继续培养25～30天；将已经幼化伸长，生长旺盛的白花泡桐优树接穗萌发的嫩芽；

第四步、继代增殖培养：将已经幼化伸长，生长旺盛的白花泡桐优树接穗萌发的嫩芽，剪切长度为1.5～3.0cm带1～2节的茎段，转移至增殖培养基中，进行增殖培养，增殖培养继代周期为25～35天，培养条件为：室温27～29℃，光照强度3000～4000lux , 光照时间每天8:00～20:00；

第五步、诱导生根：切取长约3cm的粗壮的白花泡桐幼化的嫩芽，转接在生根培养基中诱导生根，生根培养条件的室温为24～29℃，生根光照时间控制为每天12h，光照强度为2000～4000lux，生根时间为7～12天；

第六步、炼苗和移栽：待白花泡桐试管苗根长至1.0～1.5cm左右，进行室内炼苗，炼苗时先洗净附着在根部的培养基，然后栽植到泥炭土和珍珠岩的混合基质中，混合基质中的草炭土和珍珠岩的比例为3：1或2：1，浇透水，覆盖保湿3～5天，25天后将幼苗移栽到口径为15cm的营养盆中，营养盆中装有沙壤土和泥炭土比例为4：1的混合基质，置于塑料大棚壮苗，壮苗过程中，根据需要及时浇水、喷施叶面肥溶液及预防病虫害，大棚壮苗一个半月，进行大田移栽。

2.根据权利要求1所述的一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于：（一）材料的嫁接复壮中的嫁接时间秋季和早春进行，嫁接方式采用芽接和枝接，砧木采用川泡桐优树的川优3。

3.根据权利要求1所述的一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于：（二）组织培养和试管嫁接幼化的第二步、初代培养基步骤中的初代培养培养基为：MS＋4mg/L（2.0～6.0）6-BA+0.3mg/L(0.2～0.5)NAA，再加入琼脂5.1g/L，蔗糖30g/L，其PH值为5.8～6.0。

4.根据权利要求1所述的一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于：（二）组织培养和试管嫁接幼化的第三步、试管嫁接幼化步骤中的试管嫁接幼化培养基为：MS+（0.1～0.3）mg/LNAA，再加入琼脂5.1g/L，蔗糖浓度为15～30g/L，PH值为5.8～6.0。

5.根据权利要求1所述的一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于：（二）组织培养和试管嫁接幼化的第四步、继代增殖培养步骤中的增殖培养基为：1/2MS ＋6 mg/L（4.0～8.0）6-BA +0.3 mg/L NAA，再加入琼脂5.1g/L，蔗糖15 g / L～20g /L，PH值为5.8～6.0。

6.根据权利要求1所述的一种白花泡桐优树试管嫁接幼化的方法，其特征在于：（二）组织培养和试管嫁接幼化的第五步、诱导生根步骤中的生根培养基为：1/2MS+（0.1～0.2 mg/L） NAA +（0～0.2 mg/L）IBA，再加入琼脂5.0～6.0g/L ，蔗糖15～20g/L，PH值为5.8～6.0。