[发明专利]梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于设有载体板、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgG抗体；辣根过氧化物酶标记抗人γ链抗体。

2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述梅毒特异性重组抗原为TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47。

3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述载体板采用PVC板。

4.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备梅毒特异性重组抗原

采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒特异性重组抗原；

2)硝酸纤维素膜的点样

在硝酸纤维素膜IgG检测线上包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgG抗体，晾干；

3)制备抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体

以人IgG特异性片段γ链为抗原免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选获得稳定分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

4)抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记

采用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记；

5)制备免疫印迹试剂盒

将硝酸纤维膜粘贴在载体板上表面，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上，在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人IgG抗体，用切条机切成条状，与酶标记的抗人γ链单克隆抗体及其底物共同组装成梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒。

5.如权利要求4所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤1)、2)、5)中，所述梅毒特异性重组抗原为TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47。

6.如权利要求4所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述梅毒特异性重组抗原和人IgG抗体的浓度为1～4mg/mL；点样量为1μL/cm。

7.如权利要求4所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤3)中，采用ELISA的方法鉴定McAb效价在1∶10⁷以上。

8.如权利要求4所述的梅毒特异性IgG抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述辣根过氧化物酶的底物由0.03％(W/V)的过氧化氢和0.07％(W/V)的二氨基联苯胺组成。