[发明专利]猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法有效
| 申请号： | 201110026895.2 | 申请日： | 2011-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN102154366A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 许家荣;陆承平;黄冬艳 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/863 | 分类号： | C12N15/863;C12N15/44;C12N7/01;C12N7/02;G01N33/569;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 流感病毒 h3n2 ha1 蛋白 重组 痘病毒 及其 制备 方法 | ||
1.一种猪流感病毒H3N2亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H3，其特征在于该转移载体是将序列为SEQ ID NO.1所示的猪流感病毒H3N2毒株HA1基因序列插入猪痘病毒载体pUSZ11的KpnI和BamHI酶切位点所得。
2.一种猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒，其特征在于该病毒是将猪痘病毒和权利要求1所述的转移载体pUSZ11/H3感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得的阳性克隆。
3.根据权利要求2所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒，其特征在于所述的猪痘病毒为ATCC保藏号为VR-363TM野生型猪痘病毒wtSPV。
4.根据权利要求3所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒，其特征在于所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒于2011年1月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：V201103。
5.权利要求2所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)根据GenBank收录号为FJ157986的猪流感病毒H3N2(A/swine/Guangxi/1/2004(H3N2))毒株HA1的基因序列，自行设计并合成序列为SEQ IDNO.1所示的HA1基因；
(2)将所述的序列为SEQ ID NO.1的HA1基因插入猪痘病毒载体pUSZ11中，然后通过酶切和测序鉴定，获得所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H3；
(3)将猪痘病毒和所述的HA1基因的转移载体pUSZ11/H3感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒。
6.根据权利要求5所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的制备方法，其特征在于步骤(2)所述的HA1基因插入猪痘病毒载体pUSZ11的具体方法为利用KpnI和BamHI分别对步骤(1)所述的序列为SEQ ID NO.1的HA1基因和猪痘病毒载体pUSZ11进行双酶切，回收大小为1034bp的HA1基因目标片段和大小为8382bp的猪痘病毒载体pUSZ11线性大片段，连接两片段，得到重组质粒，经测序，将测序结果符合目的片段的质粒定名为pUSZ11/H3。
7.根据权利要求5所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的制备方法，其特征在于所述的制备方法还包括所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的蚀斑纯化步骤。
8.根据权利要求5所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒的制备方法，其特征在于所述的制备方法还包括利用IFA和Western-blot技术对所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒进行表达鉴定的步骤。
9.权利要求2所述的猪流感病毒H3N2亚型HA1蛋白重组猪痘病毒在制备预防和/或治疗猪流感病毒H3N2亚型感染的药物中的应用。
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