[发明专利]一种细胞DNA损伤检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种细胞DNA损伤检测试剂盒，其特征在于设有盒体和试剂，所述试剂包括低熔点琼脂糖、细胞裂解液、细胞解旋液和DNA染色剂；

所述细胞裂解液由溶液A和溶液B组成，所述溶液A的配方为：2～3mol/LNaCl，0.1～0.2mol/L EDTA-Na₂，5～100mmol/L Tris，质量分数0.5％～1.5％肌氨酸钠，余为去离子水；所述溶液B的配方为体积分数为1％～2％Triton-100，5％～15％二甲基亚砜，余为去离子水，所述溶液A与溶液B按体积比1∶1混合；

所述细胞解旋液的配方为：0.2～0.5mol/L NaOH，1～2mmol/L EDTA-Na₂，余为去离子水；

所述DNA染色剂为碘化丙啶、溴化乙锭、Hoechst 33342、hoechst 33358或DAPI。

2.如权利要求1所述的一种细胞DNA损伤检测试剂盒，其特征在于所述溶液A的配方为：2.5mol/L NaCl，0.1mol/LEDTA-Na₂，10mmol/LTris，质量分数为1％肌氨酸钠，余为去离子水；所述溶液B的配方为：体积分数为1％Triton-100和10％二甲基亚砜，余为去离子水。

3.如权利要求1所述的一种细胞DNA损伤检测试剂盒，其特征在于所述细胞解旋液的配方为：0.3mol/L NaOH和1mmol/L EDTA-Na₂，余为去离子水。

4.如权利要求1所述的一种细胞DNA损伤检测试剂盒，其特征在于所述碘化丙啶的浓度为1～5μg/ml，所述溴化乙锭的浓度为10～100μg/ml。

5.一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将细胞DNA损伤样品悬液与低熔点琼脂糖凝胶混匀得混合液，再将混合液点样到凝胶板样品孔中；

2)将点样后的凝胶板浸入细胞裂解液中避光裂解；

3)将裂解后的凝胶板浸入细胞解旋液中解旋，解旋完毕后电泳；

4)往电泳后的凝胶板样品孔滴加DNA染色剂染色，在荧光显微镜下分析检测结果。

6.如权利要求5所述的一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述低熔点琼脂糖凝胶的质量分数为0.8％～1.5％，所述细胞DNA损伤样品悬液与低熔点琼脂糖凝胶的体积比为1∶2～10；所述点样的体积为10～25μl/样品孔；所述凝胶板采用96孔细胞培养板的板盖，所述板盖上的凹陷用作样品孔。

7.如权利要求6所述的一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于所述凹陷底部刻有划痕。

8.如权利要求5所述的一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述细胞裂解液在使用之前进行4℃预冷；所述裂解的条件为：温度4～10℃，时间1～1.5h；所述裂解完成后采用PBS洗涤凝胶板1～3次，每次5～10min。

9.如权利要求5所述的一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于在步骤3)中，所述解旋的条件为：温度4～10℃，时间30～45min；所述电泳的条件为：温度4～10℃，时间30～60min，电流50～150mA；所述电泳完成后采用Tris缓冲液洗涤凝胶板1～3次，每次5～10min。

10.如权利要求5所述的一种细胞DNA损伤检测方法，其特征在于在步骤4)中，所述染色的条件为：温度4～10℃，时间5～20min。